[發明專利]氨基化石墨烯量子點/BSA復合探針檢測胰蛋白酶的方法

有效

• 申請號: 201610932940.3
• 申請日: 2016-10-25
• 公開（公告）號: CN106568749B
• 公開（公告）日: 2019-03-05
• 發明（設計）人: 劉燕;胡肖;劉占超;倪良;吳維富
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種氨基化石墨烯量子點/BSA復合探針檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、氨基化石墨烯量子點的制備：

首先制備氧化石墨烯GO，配制1.0mg/mL的GO溶液，量取5mL配制好的GO溶液、3～9mL質量分數28％的氨水和5mL二次蒸餾水混合均勻，繼續攪拌30min后迅速將其轉移至聚四氟乙烯高壓反應釜中進行恒溫熱反應，冷卻至室溫，使用0.22um的聚四氟乙烯濾膜抽濾，得濾液；將濾液在100℃下加熱1h除去多余的氨；將所得溶液使用10kDa的滲析袋滲析24h，真空冷凍干燥后制得氨基化石墨烯量子點；

步驟2、氨基化石墨烯量子點/牛血清蛋白復合探針的制備：

配制pH＝8的磷酸緩沖溶液和0.1mg/mL的氨基化石墨烯量子點溶液待用；在劇烈攪拌的條件下分別量取氨基化石墨烯量子點溶液4mL，磷酸緩沖溶液4mL和BSA溶液2mL，混合，其中BSA溶液的濃度為1mg/mL，在混合好的溶液置于37℃下恒溫孵化，即可得到氨基化石墨烯量子點/牛血清蛋白復合探針；將復合探針溶液置于4℃下保存待用；

步驟3、熒光測試：

將步驟2制備的0.1mg/mL的氨基化石墨烯量子點溶液進行熒光光譜測試，得到的最佳激發波長為Ex＝340nm，最佳發射波長為Em＝431nm；在相同的條件下測試步驟2得到的氨基化石墨烯量子點/牛血清蛋白復合探針，當激發波長為Ex＝340nm，復合探針的發射波長為Em＝445nm；相比較氨基化石墨烯量子點的熒光發射波長，復合探針的熒光發射波長發生了紅移，并且復合探針的熒光強度增強；

步驟4、胰蛋白酶的檢測：

量取制備好的氨基化石墨烯量子點/牛血清蛋白復合探針2mL，加入2mL的pH＝8的磷酸緩沖溶液混合均勻，再加入不同濃度的胰蛋白酶溶液1mL，混合均勻，在37℃下孵化，檢測其在激發波長為Ex＝340nm時的發射波長和熒光強度。

2.根據權利要求1所述的一種氨基化石墨烯量子點/BSA復合探針檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，步驟1中，所述的恒溫熱反應溫度為70～150℃，反應的時間為4～6h。

3.根據權利要求1所述的一種氨基化石墨烯量子點/BSA復合探針檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，步驟2中，所述的37℃下恒溫孵化時間為2～12h。

4.根據權利要求1所述的一種氨基化石墨烯量子點/BSA復合探針檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，步驟4中，所述不同濃度的胰蛋白酶溶液的濃度范圍為0～100μg/mL。

5.根據權利要求1所述的一種氨基化石墨烯量子點/BSA復合探針檢測胰蛋白酶的方法，其特征在于，步驟4中，所述的37℃下孵化時間為15min～2h。