[發明專利]一種脫落細胞一步染色法、所用染料組合及試劑盒

在審

• 申請號: 201610929313.4
• 申請日: 2016-10-31
• 公開（公告）號: CN108007754A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 陳石磊;趙路;趙志煒
• 申請（專利權）人: 陳石磊
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

本發明屬于細胞病理學領域，具體涉及一種脫落細胞一步染色法、所用染料組合及試劑盒。所述一步染色指對脫落細胞的細胞核及細胞漿進行同步染色，包括采用熒光染料組合對脫落細胞進行一步染色，所述熒光染料組合含有細胞核熒光染料和細胞漿熒光染料。本發明所采用熒光染料組合對脫落細胞的細胞核及細胞漿進行同步染色，且無需清洗背景熒光，從而能夠實現快速染色和檢測。本發明采用單一紫外光源激發并取得良好的效果，能夠簡化光源和避免兩次照射形成圖像的復雜性。

技術領域

本發明屬于細胞病理學領域，具體涉及一種脫落細胞一步染色法、所用染料組合及試劑盒。

背景技術

脫落細胞學檢查是指采集人體管腔器官表面脫落的上皮細胞，經染色后用顯微鏡觀察其形態并做出診斷。它被廣泛用于癌前病變篩查。脫落細胞的主要來源有：子宮頸脫落細胞、漿膜腔積液脫落細胞及泌尿系統脫落細胞。

常規脫落細胞染色法是利用細胞中各種結構的生化組成不同，與嗜酸性或嗜鹼性染料反應而顯示不同的顏色，使細胞的形態和結構易于辨認。常用的有巴氏和瑞-姬氏染色。

巴氏染色法：此染色法是脫落細胞染色中最常用的方法。它的特點是細胞核結構清晰，細胞漿分色明顯，透明度好，胞漿顏色鮮艷。而且標本不易脫色，便于長期保存。巴氏染色對早期腫瘤細胞核內DNA含量變化不顯著。所以，目前用顯微鏡確認的腫瘤病人多為晚期。其主要原因是巴氏染色對早期腫瘤細胞內微量DNA增高不敏感。巴氏染色過程復雜。同時，醫生的經驗和視覺疲勞也影響閱片的質量和判斷。

瑞-姬氏染色法：此染色法利用姬氏法對細胞核著色較好，但細胞漿著色較差。瑞氏法胞漿著色清晰。兩者復合之后可以彌補相互的不足。瑞姬氏染色的缺點是顯示細胞色差弱，極易染成模糊色團，使細胞微結構不易辨認。染色過程需要30分鐘。

細胞中染色體數量和DNA含量反映細胞生長及分化狀態,，測定DNA含量的變化對判斷細胞的分化，腫瘤的性質及預后具有重要意義。在進行脫落細胞DNA含量(倍體)檢測時，細胞核DNA染色質量的好壞直接影響診斷的準確性。

Feulgen染色法：此染色法是目前應用較多的一種對細胞核DNA染色的方法。該方法具有對DNA較好選擇性的特點成為脫落細胞DNA倍體染色的主要方法(CN 02181534A)。但Feulgen染色存在幾項缺點：

(1)染色操作過程復雜，配液及反應條件要求嚴格，耗時長(數小時)。

(2)染色的特異性不強，復染HE或EA36背景易共染，直接影響判讀的準確性。

(3)Feulgen試劑只對細胞核反應,不顯示細胞漿的形態,因此,需要做第二次染色(HE,EA36)。

(4)染色后細胞切片容易褪色無法長期保存。

(5)染色的效果與巴氏有很大不同。醫生無法延用累積的(巴氏染色)經驗閱片。由于以上的缺點，Feulgen染色一直沒有在臨床上得到廣泛的使用。

發明內容

為了克服現有技術中所存在的問題，本發明的目的在于提供一種脫落細胞一步染色法、所用染料組合及試劑盒。

為了實現上述目的以及其他相關目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供了一種脫落細胞一步染色法，所述一步染色指對脫落細胞的細胞核及細胞漿進行同步染色，包括采用熒光染料組合對脫落細胞進行一步染色，所述熒光染料組合含有細胞核熒光染料和細胞漿熒光染料。

所述細胞核熒光染料是指對脫落細胞的細胞核進行染色的熒光染料。所述細胞漿熒光染料是指對脫落細胞的細胞漿進行染色的熒光染料。

所述細胞核熒光染料對細胞核染色后發出的熒光波長與細胞漿熒光染料對細胞漿染色后發出的熒光波長不同，能夠區分。