[發明專利]一種高效檢測水產品中頭孢菌素殘留量的方法

有效

• 申請號: 201610920267.1
• 申請日: 2016-10-21
• 公開（公告）號: CN107037140B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 梅光明;丁國芳;張小軍;孟春英
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及一種高效檢測水產品中頭孢菌素殘留量的方法，所述方法包括：樣品經提取溶劑提取、多壁碳納米管固相萃取凈化后，采用超高效液相色譜C₁₈柱分離，三重四級桿質譜儀在多反應監測模式下測定，采用基質匹配法制作標準曲線進行外標法定量。本發明檢測成本低，方法準確、靈敏和快速，可為水產品中頭孢菌素類的殘留監控提供技術支持。

技術領域

本發明屬于檢測分析技術領域，涉及一種檢測頭孢菌素殘留量的方法，尤其涉及一種檢測成本低，方法準確、靈敏和快速的多壁碳納米管凈化-超高效液相色譜-質譜法測定水產品中頭孢菌素殘留量的方法。

背景技術

頭孢菌素又稱先鋒霉素，是分子中含有頭孢烯和頭霉烯兩類β-內酰胺類的半合成抗生素，具有廣譜抗菌作用，醫學臨床中主要用于治療革蘭氏菌如葡萄球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌和沙門氏菌等引起的各種感染，在動物養殖業中也廣泛用于治療畜禽動物尿道、胃腸道和呼吸道感染。動物產品中過量使用頭孢菌素造成的殘留會通過食物鏈傳遞給人體健康造成影響，引起過敏反應、三致效應和細菌耐藥性增強等危害。因此世界各國對部分畜禽類動物源產品均提出頭孢菌素殘留限量要求。

近年來，隨著水產養殖業中新病疫情的出現和漁民盲目使用抗生素的問題，一些臨床效果較好的人用或獸用藥也開始被用于水產養殖中，市場上也出現了供水產養殖用的含頭孢菌素投入品。

目前還沒有水產品中頭孢菌素殘留限量要求，也缺少相應的檢測方法。食品中頭孢菌素殘留檢測的方法主要有微生物法、免疫法、液相色譜法、液質聯用法和毛細管電泳法。相關的一些國家標準也主要適用于畜禽動物肌肉、肝臟、腎臟、雞蛋、牛奶和蜂蜜等基質，GB/T 22960-2008僅規定適用于河豚魚和鰻魚中5種頭孢菌素測定。而實際工作中發現GB/T 22960-2008用于水產品測定時，一方面由于水產品含水率高，正己烷脫脂凈化后的乙腈提取液旋蒸過程中易產生爆沸現象，且樣品難以減壓蒸發至凈干，給后續定容體積帶來誤差，另一方面因水產品種類較多，基質成分復雜，蛋白質、脂肪等共存干擾物多，僅靠正己烷液萃取除雜效果不佳，質譜測定時基質干擾嚴重，特別是低濃度樣品測定效果較差，回收率偏低。因此有必要建立一種快速、準確且適合多種水產品基質的頭孢菌素類多殘留檢測方法。固相萃取SPE是獸藥殘留分析中常用的一種樣品前處理凈化技術。商品化的SPE小柱價格昂貴，檢測成本較高。

多壁碳納米管(MWCNTs)為一種功能性材料，可通過非共價作用力與目標物分子結合，吸附能力強，且具有比表面積高、化學性能好、機械及熱穩定性高和材料成本低等優點，在重金屬吸附和有機物檢測分析工作中得到了較好的應用。目前尚未見將MWCNTs用于頭孢菌素殘留檢測分析前處理的研究。

發明內容

本發明的目的在于為了解決現有水產品中頭孢菌素殘留檢測的國家標準方法存在的適用品種窄、待測物種類偏少和方法回收率偏低的缺陷而提供一種檢測成本低，方法準確、靈敏和快速的多壁碳納米管凈化-超高效液相色譜-質譜法測定水產品中頭孢菌素殘留量的方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種高效檢測水產品中頭孢菌素殘留量的方法，所述方法包括：樣品經提取溶劑提取、多壁碳納米管固相萃取凈化后，采用超高效液相色譜C₁₈柱分離，三重四級桿質譜儀在多反應監測模式下測定，采用基質匹配法制作標準曲線進行外標法定量。

作為優選，多壁碳納米管固相萃取柱的制備方法為：稱取2g多壁碳納米管粉末于500mL單口燒瓶中，加入50mL濃硫酸和100mL濃硝酸，超聲振蕩1h，靜置后除去上層液，固體物反復用純水洗至中性，80℃干燥后研磨成細粉末；裝柱前，分別用純水、甲醇清洗6mL的聚丙烯SPE柱空管和20μm聚乙烯柱篩板，待小柱和篩板干燥后，先用篩板封住SPE柱底部，再稱取45-80mg多壁碳納米管于小柱中，墊上柱篩板壓實，通過調節上篩板向下壓緊程度來控制多壁碳納米管填料厚度在0.6cm；填裝好的多壁碳納米管SPE柱裝于密封袋中，使用前使用前用5mL甲醇、5mL水和5mL磷酸鹽緩沖液活化。