[發明專利]一種多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法

有效

• 申請號: 201610911063.1
• 申請日: 2016-10-19
• 公開（公告）號: CN106568856B
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 黃松;賴小平;侯少貞;蔣東旭
• 申請（專利權）人: 東莞廣州中醫藥大學中醫藥數理工程研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法。涉及中藥質量控制方法。指紋圖譜檢測方法包括以下步驟：對照品溶液的制備；供試品溶液的制備；色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為甲醇與0.1％甲酸組成的梯度洗脫液，柱溫是25℃；紫外檢測波長為285nm；時間為140min；高效液相色譜法測得指紋圖譜。本方法可以有效地用于多穗柯葉的質量控制。

技術領域

本發明涉及中藥提取物及其質量控制方法，具體涉及多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法的建立。

背景技術

多穗柯，來源于殼斗科石柯屬Lithocarpus polystachyus(Wall.)Rehd.，又名多穗石柯、多穗石櫟；因葉子嚼之有甜味，故名為甜茶，在貴州稱為甘茶，在廣東稱為大葉稠子。在我國長江以南各省區均有分布，尤以武夷山分布最廣，此外，在桂、湘、皖等省資源最豐富，其中在廣西(桂)的資源貯藏量約達數百噸。在粵、云、川、閩等省資源量次之。印度，泰國也有少許分布。

多穗柯是一種兼具藥、茶、糖三種功能的藥食兩用植物，民間常取其嫩葉泡茶，茶色金黃鮮艷，味道甜中略有苦澀，回味持久，古人常用于清暑解渴。多穗柯葉中含有高達10％的高甜度、低熱量的非糖甜味劑，其甜味成分主要為二氫查爾酮類根皮苷、3-羥基根皮苷、三葉苷等。

多穗柯葉具有降糖、降脂、抗氧化等功用，現代研究表明，其富含的豐富的黃酮類成分為其主要有效成分。為進一步完善多穗柯的質量標準，同時為探索前期藥理實驗不穩定的原因，本實驗展開對其有效成分的指紋圖譜的研究。

發明內容

本發明的目的是建立多穗柯葉有效部位HPLC指紋圖譜的檢測方法。

為達到本發明的目的所采用的技術方案：用高效液相色譜法建立多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法，具體包括如下步驟：

①對照品溶液的制備：精密稱取3-OH根皮苷對照品，加入50％乙醇進行溶解，配成濃度為0.50mg/mL的溶液，作為對照品溶液；

②供試品溶液的制備：取多穗柯葉藥材，打粉，并過二號篩，準確稱取5.00g，放置于125mL具塞錐形瓶中，量取40mL50％的乙醇加入其中，放置于恒溫水浴鍋中，80℃加熱回流提取60min，連續提取三次，最后將三次提取液混合均勻，放冷，過濾，將濾液定容于250mL量瓶中，取適量，過0.45μm微孔濾膜，續濾液置于液相瓶中，即得；

③色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲醇與甲酸組成的梯度洗脫液，柱溫是20～30℃；紫外檢測波長：200～400nm；

④測定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。

進一步優選的方法可以通過下述步驟實施：

①對照品溶液的制備：精密稱取3-OH根皮苷10.05mg，加入50％乙醇進行溶解，定容于10mL容量瓶中，精密移取1mL上述溶液，50％乙醇定容于10mL容量瓶中，配成濃度為0.1005mg/mL的溶液；精密稱取根皮苷5.00mg，加入50％乙醇進行溶解，定容于10mL容量瓶中，配成濃度為0.50mg/mL的溶液，即得；

②供試品溶液的制備：取批號為20140815的多穗柯葉藥材，打粉，并過二號篩，準確稱取5.00g，放置于125mL具塞錐形瓶中，量取40mL50％的乙醇加入其中，放置于恒溫水浴鍋中，80℃加熱回流提取60min，連續提取三次，最后將三次提取液混合均勻，放冷，過濾，將濾液定容于250mL量瓶中，取適量，過0.45μm微孔濾膜，續濾液置于液相瓶中，即得；

③色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為甲醇與0.1％～2.0％甲酸水溶液組成的梯度洗脫液，柱溫是20～30℃；紫外檢測波長為200～400nm；