[發(fā)明專利]一種多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610911063.1
• 申請日: 2016-10-19
• 公開（公告）號: CN106568856B
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設計）人: 黃松;賴小平;侯少貞;蔣東旭
• 申請（專利權）人: 東莞廣州中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法，其包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備：精密稱取3-OH根皮苷10.05mg，加入50％乙醇進行溶解，定容于10mL容量瓶中，精密移取1mL上述溶液，50％乙醇定容于10mL容量瓶中，配成濃度為0.1005mg/mL的溶液；精密稱取根皮苷5.00mg，加入50％乙醇進行溶解，定容于10mL容量瓶中，配成濃度為0.50mg/mL的溶液，即得；

(2)供試品溶液的制備：取多穗柯葉藥材，打粉，并過二號篩，準確稱取5.00g，放置于125mL具塞錐形瓶中，量取40mL 50％的乙醇加入其中，放置于恒溫水浴鍋中，80℃加熱回流提取60min，連續(xù)提取三次，最后將三次提取液混合均勻，放冷，過濾，將濾液定容于250mL量瓶中，取適量，過0.45μm微孔濾膜，續(xù)濾液置于液相瓶中，即得；

(3)色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲醇與0.1％甲酸組成的梯度洗脫液，柱溫是25℃；紫外檢測波長為254nm；

所述的梯度洗脫，梯度洗脫程序以如下體積濃度配置進行：

0分鐘時，流動相A為18％的甲醇溶液、流動相B為82％的0.1％甲酸水溶液；

20分鐘時，流動相A為35％的甲醇溶液、流動相B為65％的0.1％甲酸水溶液；

60分鐘時，流動相A為35％的甲醇溶液、流動相B為65％的0.1％甲酸水溶液；

120分鐘時，流動相A為60％的甲醇溶液、流動相B為40％的0.1％甲酸水溶液；

140分鐘時，流動相A為60％的甲醇溶液、流動相B為40％的0.1％甲酸水溶液；

(4)測定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜；

所述指紋圖譜中有10個特征共有峰，其中3號色譜峰為3-OH根皮苷，最強峰為6號色譜峰為根皮苷參照峰，圖譜總長度為140min，具體如下：

1號峰，平均保留時間RT為33.20min，RSD為0.41％，峰面積為292467.2，RSD為34.25％；

2號峰，平均保留時間RT為38.35min，RSD為0.35％，峰面積為159295.1，RSD為48.19％；

3號峰，平均保留時間RT為40.84min，RSD為0.90％，峰面積為551159.5，RSD為26.29％；

4號峰，平均保留時間RT為46.65min，RSD為0.92％，峰面積為166383.2，RSD為24.90％；

5號峰，平均保留時間RT為48.64min，RSD為0.65％，峰面積為669754.3，RSD為43.54％；

6號峰，平均保留時間RT為61.09min，RSD為0.76％，峰面積為6032428.7，RSD為34.22％；

7號峰，平均保留時間RT為68.70min，RSD為0.65％，峰面積為555096.1，RSD為32.46％；

8號峰，平均保留時間RT為72.24min，RSD為0.66％，峰面積為212800.3，RSD為44.16％；

9號峰，平均保留時間RT為90.31min，RSD為0.45％，峰面積為503140.4，RSD為32.30％；

10號峰，平均保留時間RT為98.52min，RSD為0.32％，峰面積為105901.2，RSD為34.59％。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種多穗柯葉有效部位的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：

所述步驟(3)色譜條件：流速：0.8mL/min；時間：140min；

所述步驟(4)測定：采用精密吸取供試品溶液25μL注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。