[發明專利]hPDGF-BB與hFGF2雙基因重組病毒載體及其應用

在審

• 申請號: 201610907299.8
• 申請日: 2016-10-17
• 公開（公告）號: CN108384806A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 馬依彤;陳邦黨;楊毅寧;陳小翠;劉芬;賀春暉
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N15/12;A61K48/00;A61K38/18;A61P9/10
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯建武;楊涵

本發明涉及基因工程技術領域，是一種hPDGF?BB與hFGF2雙基因重組病毒載體及其應用，該hPDGF?BB與hFGF2雙基因重組病毒載體的hPDGF?BB基因的核苷酸序列為SeqID NO.1所示的序列、hFGF2基因的核苷酸序列為SeqID NO.2所示的序列。本發明提供了一種hPDGF?BB與hFGF2雙基因重組病毒載體，并且采用該hPDGF?BB與hFGF2雙基因重組病毒載體制備治療老齡缺血性心臟疾病引發的心肌缺血損傷的基因藥物可經靜脈注射給藥、同時具有高效、靶向、長期穩定表達的優點，為治療包括心肌梗死、心力衰竭、心肌缺血再灌注損傷等缺血性心臟疾病提供了一種新的基因治療藥物，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，是一種hPDGF-BB與hFGF2雙基因重組病毒載體及其應用。

背景技術

缺血性心臟病(ischaemic heart disease,IHD)是目前嚴重危害人類健康的心血管疾病，已成為21世紀全球最重要的公共衛生問題。據《柳葉刀》報道，IHD列全球死因譜的第1位，造成2010年全球703萬人死亡，而中國因IHD死亡人數高達95萬。目前我國約有心肌梗死250萬人，年新發急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)超過50萬人，2014年AMI的住院總費用為133.75億元，心肌梗死已成為威脅國人健康的“隱形殺手”。老齡是AMI發病的高危因素，約60％至80％的AMI發生于年齡65歲以上的患者，并且隨著年齡的增加，病死率急劇攀升，約60％的死亡發生于年齡75歲以上的AMI患者，因此，尋求新的干預措施，改善老年AMI患者的預后，提高生存率，是當今世界醫學界亟待解決的重大問題。

研究表明AMI由于心肌組織缺氧，細胞內缺氧誘導因子(HIF1α)蛋白增多，進而上調血管內皮生長因子(VEGF)及其受體的表達，導致心肌缺血區毛細血管密度的增加，從而部分地減輕冠狀動脈狹窄或阻塞的后果。盡管如此，這種內生性的促血管生成物質增多常常不足以盡快建立足夠豐富的側支動脈和毛細血管網來代償原有的血供，缺血癥狀難以得到改善。

近年來，血管新生治療法為AMI的治療帶來了新的契機，血管新生治療法即將外延性血管新生因子或基因導入壞死心肌組織，實現心肌缺血區的自我搭橋，達到恢復缺血心肌的血液供應、修復或減少壞死心肌組織、改善患者癥狀和預后的目的，為AMI的治療開辟了一條嶄新的途徑。

毋庸置疑，血管新生療法是AMI治療中最具前景的治療策略。目前在生理和病理性血管新生治療中，VEGF因其強大的促內皮細胞增殖和促血管生成作用而被廣泛用于心肌及外周缺血性疾病的研究。動物實驗研究證實VEGF治療有利于側支血管形成和增加缺血部位血供，但是單一促血管生長因子的臨床研究尚未達到理想的預期目的，越來越多的證據顯示VEGF誘導的新生血管常常是不成熟和缺乏功能的，而且持續過量表達VEGF可能誘導局部水腫和血管瘤形成，導致心功能惡化、加速缺血肢體的壞死和動脈粥樣硬化的發生。因此，尋找更加安全有效的靶基因仍是研究的重點。

新生血管的起源、發展以及維護是一個復雜的、相互作用的過程，涉及血管新生、血管再生以及動脈生成，單一促血管生長因子的作用無法激活和完成血管新生和成熟的整個調控過程，這可能是臨床試驗失敗的主要原因。在血管新生階段起主要作用的因子稱為促血管生成因子，如FGF2和VEGF。在動脈生成階段發揮主要作用的血管生長因子稱為促動脈生成因子，如血小板衍生生長因子(PDGF-BB)、肝細胞生長因子(HGF)等。FGF2由內皮細胞及平滑肌細胞分泌，在刺激血管新生和增加血管強度與韌性方面起重要作用，它能夠調節靶細胞包括內皮細胞的生長和分化；而PDGF-BB被認為是作用很強的促動脈生成因子，可以誘導內皮細胞、血管平滑肌細胞的增殖與移行，通過刺激血管內皮細胞釋放VEGF而間接促進微血管的生長；PDGF-BB可募集周細胞和血管平滑肌細胞包繞新生血管網絡形成完整的血管結構，從而提高新生血管的成熟和穩定性，因此，PDGF-BB具有促血管新生及動脈新生的雙重作用。