[發明專利]一種細胞制劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201610906738.3
• 申請日: 2016-10-18
• 公開（公告）號: CN106619718A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;趙萌萌;王小燕
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: A61K35/16
• 分類號: A61K35/16;A61K35/28;A61P9/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 趙青朵

技術領域

本發明涉及細胞制劑技術領域，特別涉及一種細胞制劑及其制備方法和應用。

背景技術

心力衰竭(heart failure)簡稱心衰，是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發生障礙，不能將靜脈回心血量充分排出心臟，導致靜脈系統血液淤積，動脈系統血液灌注不足，從而引起心臟循環障礙癥候群，此種障礙癥候群集中表現為肺淤血、腔靜脈淤血。根據心力衰竭發生的緩急，臨床可分為急性心力衰竭和慢性心力衰竭。急性心衰會引發急性肺水腫，起病急，病情可迅速發展至危重狀態。突發的嚴重呼吸困難、端坐呼吸、喘息不止、煩躁不安并有恐懼感，呼吸頻率可達30～50次/分；頻繁咳嗽并咯出大量粉紅色泡沫樣痰；心率快，心尖部常可聞及奔馬律；兩肺滿布濕啰音和哮鳴音。還會引發心源性休克，表現為低血壓、組織低灌注狀態、血流動力學障礙、代謝性酸中毒和低氧血癥。急性心衰常危及生命，必須緊急搶救。

目前的臨床治療主要采用藥物治療、介入治療和外科治療等手段：(1)初始治療為經面罩或鼻導管吸氧；嗎啡、袢利尿劑、強心劑等經靜脈給予。使患者取坐位或半臥位，兩腿下垂，減少下肢靜脈回流。(2)病情仍不緩解者應根據收縮壓和肺淤血狀況選擇應用血管活性藥物，如正性肌力藥、血管擴張藥和血管收縮藥等。(3)病情嚴重、血壓持續降低(<90mmHg)甚至心源性休克者，應監測血流動力學，并采用主動脈內球囊反搏、機械通氣支持、血液凈化、心室機械輔助裝置以及外科手術等各種非藥物治療方法。(4)動態測定BNP/NT-proBNP有助于指導急性心衰的治療，治療后其水平仍高居不下者，提示預后差，應加強治療；治療后其水平降低且降幅>30％，提示治療有效，預后好。但這些治療方法只能在一定程度上緩解心力衰竭的發生。

干細胞是一類具有自我復制能力和分化能力的多潛能細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫學界將其稱之為“萬用細胞”。經過前人的研究發現，骨髓間充質干細胞在適宜的細胞因子作用下可以作為一種藥物直接或者間接對受損的心肌細胞進行修復或者補充，目前已經成為心衰治療的研究熱點之一。因此，研發一種可有效治療心衰的干細胞制劑成為必然趨勢。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種細胞制劑及其制備方法和應用。該細胞制劑可有效治療心衰。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種細胞制劑，其包含間充質干細胞的富血小板血漿。

富血小板血漿(Platelet-rich plasma，PRP)指的是自體全血經離心后得到的血小板濃縮物，含有大量生長因子及蛋白質。血小板中含有大量的生長因子，如表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、轉化生長因子-β(TGF-β)、類胰島素生長因子(IGF)、血管內皮生長因子(VEGF)等。由于其在組織再生方面發揮著十分重要的作用，近年來，它在臨床尤其是口腔的創傷及缺損修復中被人們所重視，并取得了令人較為滿意的效果。

本發明將PRP與間充質干細胞聯合使用后，能夠更好地發揮間充質干細胞的修復作用，從而可顯著提高左心室射血分數(LVEF)水平，并可顯著降低利鈉肽(BNP)水平，效果好于單獨使用間充質干細胞或PRP，有效率可達80％～90％。可見，本發明細胞制劑可有效治療心衰。

作為優選，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞(1～10)×10⁶個。

在本發明提供的實施例中，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞1×10⁶個。

在本發明提供的另一實施例中，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞5×10⁶個。

在本發明提供的另一實施例中，每mL富血小板血漿中含間充質干細胞1×10⁷個。

在本發明提供的實施例中，間充質干細胞為骨髓間充質干細胞。

作為優選，骨髓間充質干細胞為P3代骨髓間充質干細胞。

本發明還提供了該細胞制劑的制備方法，包括如下步驟：

采用富血小板血漿重懸間充質干細胞，得到細胞制劑。

在本發明中，間充質干細胞的制備方法為：取包含間充質干細胞的培養基，去除培養基，采用消化液進行消化，得到單細胞懸液；將單細胞懸液進行離心，洗滌，得到間充質干細胞。

在本發明中，將外周血離心，獲得富血小板血漿。

在本發明提供的實施例中，富血小板血漿的制備方法具體為：將外周血采用300g轉速離心5min，然后采用300g轉速離心5min，最后采用800g轉速離心5min。