[發明專利]一種制備骨誘導成骨制劑的方法

在審

• 申請號: 201610904981.1
• 申請日: 2016-10-17
• 公開（公告）號: CN107496986A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 邊俊杰
• 申請（專利權）人: 浙江善時生物藥械（商丘）有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/22;A61L27/54;A61K35/32;A61K38/18;A61P19/08
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙)33283
• 代理人: 向慶寧

技術領域

本發明涉及一種修復骨損傷的制劑，特別的，尤其涉及一種一種誘導骨生成，促進骨組織形成或者修復骨損傷的制劑以及方法。

背景技術

骨誘導成骨技術是目前外科整復和牙周重建常用的一種技術，主要利用骨誘導因子激活骨增長和生產功能產生新骨。骨誘導因子較多，現研究主要集中于骨形態發生蛋白(bone morphogenetic protein。BMP)家族蛋白研究，骨形態發生蛋白屬低分子糖蛋白類，現已發現了骨形態發生蛋白l-14多種蛋白成分，其中骨形態發生蛋白2的骨誘導活性最強，其它骨形態發生蛋白成分對骨形態發生蛋白2有協同作用，共同參與誘導成骨過程。有學者認為骨形態發生蛋白是轉化生長因子13(TGF一13)超家族的一種，它具有明顯的骨再生和骨整合能力，能夠誘導軟骨和骨形成，并且能夠誘導血管周圍的間充質細胞轉化為骨干細胞，它與細胞外基質大分子相互作用形成的骨形態發生蛋白是調節骨形成作用的基礎。骨形態發生蛋白廣泛存在于哺乳動物的骨基質和牙基質中，是一種無種屬特異性的，屬局部生長因子的酸性糖蛋白，但骨中骨形態發生蛋白隨年齡的增大而逐漸減少，而牙基質中的骨形態發生蛋白未見減少。還有研究顯示脫鈣牙基質(demineralized dental matrix，DDM)中骨形態發生蛋白的粗提物是同質量脫鈣骨基質(demineralized bone matrix，DBM)中的10倍，相應地脫鈣牙基質在肌肉中誘導成骨量應為同質量脫鈣骨基質的10倍。但是，單純的骨形態發生蛋白在體內擴散太快，也易被蛋白酶分解，因而不能在有效的時間內作用于更多的靶細胞，其誘導活性難以得到充分的發揮；骨形態發生蛋白的純化制取比較困難，成本較高，難以在臨床廣泛推廣使用；有研究發現純化高的骨形態發生蛋白并不能取得較高的生物誘導活性，只有與相應骨基質聯合使用，才能有效誘導成骨，這是因為膠原和基質可能影響了羥基磷灰石晶體中的鈣和磷酸鹽根離子，有機物也可能扮演了一個結晶化的中心。關于骨形態發生蛋白的載體研究雖有許多報道，如采用羥基磷灰石、磷酸鹽三鈣、聚酯、膠原、脫礦骨基質、氧化鈦、血塊等載體，但是骨形態發生蛋白與載體間的結合方式、復合方法、復合比例，仍未有統一的結論。因此，當前研究的方向轉為復合性骨誘導材料的研制。

研究認為脫鈣牙基質(demineralized dentin matrix，DDM)是一種富含骨形態發生蛋白、膠原及其它蛋白多糖的復合物，是一種新型的具有骨誘導作用的人類同源性的生物活性材料，它富含多種骨誘導蛋白及其載體的復合物，形成了一種骨形態發生蛋白的天然緩慢釋放系統。例如中國發明專利95112416.1；或者中國發明專利申請，申請號201310602830.7；申請號201310602878.8中介紹了通過處理牙齒獲得這些可以促進骨頭傷口愈合或者再生的材料。另外，也在牙基質中添加一些成分，進而改進牙基質的效果，例如中國發明專利申請，申請號201510089391.3和申請號201110129457.9中的描述。

當然，還有采用體外表達BMP蛋白然后和骨骼粉末或者其他粉末混合，這種方法制備的修復材料，實際效果并不理想，主要是BMP蛋白在體外容易失去活性，和這些粉末混合后，被施加到損傷的骨骼中，容易被酶降解也失去活性。因此只有在體內保持BMP的活性，才能更好的達到促進骨組織的生長。

以上描述的方法，雖然對骨頭損傷的修復具有一定的效果，但是仍然存在很多固有的缺陷，主要體現在以下幾點：(1)牙齒作為活性BMP的來源有限，不能滿足日益增長的市場需要，畢竟光靠牙基質作為原料，限制了行業的發展；(2)對牙齒、骨骼進行粉碎處理后，通常在酸性溶液進行脫鈣，獲得含有活性蛋白BMP的粉末，但酸堿等處理雖然可以釋放鈣離子，暴露BMP蛋白，同時也對BMP的蛋白具有極大的損傷，因為BMP容易在酸性條件下變性而失去活性；這樣就降低了BMP蛋白的利用效率。

因此，有必要對現行方法進行改進，或者采用新的方法獲得骨修復材料。

發明內容

一方面，本發明提供一種制備骨誘導成骨制劑的方法，該方法包括如下步驟：1.對牙基質進行脫鈣處理；2.然后再向經過脫鈣處理的牙基質中添加外源活性蛋白BMP，即骨形態發生蛋白，從而形成誘導成骨制劑。

另一方面，本發明提供一種制備骨誘導成骨制劑的方法，該方法包括如下步驟：1.對2份牙基質進行脫鈣處理；2.然后再對經過脫鈣處理的2份牙基質進行去除骨形態發生蛋白處理；3.最后讓提取的骨形態發生蛋白與其中的1份脫鈣處理的牙基質進行混合，從而形成誘導成骨制劑。