[發明專利]一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性的核交聯普魯蘭多糖納米粒及制備方法

在審

• 申請號: 201610898562.1
• 申請日: 2016-10-13
• 公開（公告）號: CN106727423A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 涂家生;黃麗萍;孫春萌;王慧敏;李亞楠
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K31/337;A61K47/36;A61K47/22;A61P35/00
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技術領域

本發明設計一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒及其制備方法，即將親水性普魯蘭多糖進行疏水化改性，接上具有環內二硫鍵的硫辛酸小分子，再與葉酸偶聯形成葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸偶聯物，通過透析法制備葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸納米粒，并在催化量的DTT作用下使納米粒的疏水核發生二硫鍵交聯，以及該聚合物為載體的載藥納米粒的制備方法及其體外釋放的研究。

背景技術

高分子智能材料是材料領域中的一門新的分支學科，是指通過有機合成的方法，使無生命的有機材料變得有“感覺”和“知覺”。智能材料的一個重要發展方向是藥物釋放載體。應用于藥物控制釋放的智能高分子材料首先應具備環境響應特性，即根據人體內的各種刺激因素如溫度、pH等的不同而產生分子構象層次的變化，從而達到對藥物控釋的效果。

還原敏感的生物可降解聚合物和偶聯物作為一類既可用于生物治療，又可用于低分子藥物的復雜的釋放體系的的生物醫用材料而日益受到人們的重視。這些材料通常在主鏈，側鏈或交聯劑中含有雙硫鍵。雙硫鍵在循環過程和細胞外環境非常穩定，但在還原環境下會通過疏基——雙硫鍵交換反應在幾分鐘到幾小時的時間內迅速解離。核交聯組裝體是通過將核帶有的活性反應性基團進行交聯來提高載藥系統的穩定性，較常見的活性反應性基團是雙鍵，而近年來為了提高載藥系統的穩定性又實現藥物在胞內快速釋放，將二硫鍵作為核交聯反應基團越來越受到學者的關注。

普魯蘭多糖是聚乙二醇的類似物，普魯蘭多糖作為天然多糖，具有來源廣泛，水溶性好，生物相容性好等優點，且普魯蘭多糖是肝細胞表面去唾液酸糖蛋白受體的特異性配基，對肝臟具有主動靶向性，用作肝靶向藥物載體材料具有獨特優勢。硫辛酸是人體內源性物質，通常被用作抗氧化藥物來治療糖尿病和人體免疫缺陷病毒等疾病。目前，硫辛酸已經被作為交聯劑廣泛用于藥物傳遞系統中。此外，為進一步提高載體系統的靶向性傳遞效果通過化學修飾等方法將載體與配體相連，可實現載體的主動靶向性。研究表明，葉酸受體介導的傳遞系統主要針對腫瘤細胞可以實現高表達，且由于葉酸無害、免疫原性弱及與葉酸受體的結合力強對腫瘤有高度的選擇性而成為新一代靶向劑。但將這三種安全的材料通過化學合成制備具有雙靶向性的氧化還原敏感的核交聯納米粒作為抗腫瘤藥物載體的研究尚未見任何文獻或專利報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒及制備方法和應用。本發明是一種新型，價廉易得，可大量制備的納米載體，并可提高納米載體的穩定性與靶向性，降低抗腫瘤藥物的毒副作用，克服現有載體的一些不足。

本發明提供的一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒，其組成為F-A-B，其中：F是葉酸；A是普魯蘭多糖；B是內源性小分子硫辛酸。其中F∶A∶B的質量比為0.1～1∶1∶0.2～0.5，所制備的納米粒平均粒徑為100～500 nm，電位為-5～-30mV。

本發明所涉及的水溶性多糖是普魯蘭多糖，其對動物或人體腫瘤細胞或腫瘤組織生長無明顯直接抑制活性，其本身具備受體的配體性質，為肝實質細胞或肝腫瘤細胞表面去唾液酸糖蛋白受體的特異性配體，可作為肝靶向性遞藥系統的載體。分子量范圍為4,000～2000,000。

本發明提供的一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒包括的步驟：

一、葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸共聚物的合成

1)在氮氣保護下，將硫辛酸與普魯蘭多糖在催化劑4-二甲氨基吡啶和1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺脫水劑作用下反應，反應溫度為20～35℃，反應時間24～48h；

所述的普魯蘭多糖∶硫辛酸∶EDCI∶DMAP＝1∶0.2～0.5∶0.24～1.5∶0.1～0.5(摩爾比)；

2)將葉酸在催化劑4-二甲氨基吡啶和1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺脫水劑作用下活化反應0.5～2h后，加入上述普魯蘭多糖-硫辛酸溶液中，反應溫度25～40℃，反應時間為12～48h，使縮合成葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸偶聯物；

所述的普魯蘭多糖∶葉酸∶EDCI∶DMAP＝1∶0.1～1∶0.12～3∶0.05～1，摩爾比；

3)將反應物中滴加適量碳酸鈉緩沖液，透析24～48h以除盡游離葉酸，去離子水透析24～48h以除去其他小分子；

4)真空干燥或凍干，得黃色粉末；

二、透析法制備葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸納米粒