[發明專利]一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性的核交聯普魯蘭多糖納米粒及制備方法

在審

• 申請號: 201610898562.1
• 申請日: 2016-10-13
• 公開（公告）號: CN106727423A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 涂家生;黃麗萍;孫春萌;王慧敏;李亞楠
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K31/337;A61K47/36;A61K47/22;A61P35/00
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1.一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒，其特征在于它的組成為F-A-B，其中：F是葉酸；A是普魯蘭多糖；B是內源性小分子硫辛酸。其中F∶A∶B的質量比為0.1～1∶1∶0.2～0.5，所制備的納米粒平均粒徑為100～500nm，電位為-5～-30mV。

2.如權利要求1所述具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒，其特征在于：

1)所述的普魯蘭多糖分子量范圍為4,000～2,000,000；

2)所述的硫辛酸在還原環境中，分子內的二硫鍵被還原成巰基，在氧化環境中被氧化成分子間的二硫鍵；

所述還原環境為催化量的DTT或GSH，或細胞內涵體；

所述氧化環境為空氣或人體血液循環系統。

3)所述的納米粒粒徑大小會隨著F∶A∶B質量比的改變而不同，對于F∶A∶B的質量比為0.5～1∶1∶0.2～0.3，納米粒粒徑為100～200nm；對于F∶A∶B的質量比為0.1～0.5∶1∶0.3～0.5，納米粒粒徑為200～500nm；

3.權利要求1所述具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖納米粒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

一、葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸共聚物的合成

1)在氮氣保護下，將硫辛酸與普魯蘭多糖在催化劑4-二甲氨基吡啶和1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺脫水劑作用下反應，反應溫度為20～35℃，反應時間24～48h；

所述的普魯蘭多糖∶硫辛酸∶EDCI∶DMAP＝1∶0.2～0.5∶0.24～1.5∶0.1～0.5(摩爾比)；

2)將葉酸在催化劑4-二甲氨基吡啶和1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺脫水劑作用下活化反應0.5～2h后，加入上述普魯蘭多糖-硫辛酸溶液中，反應溫度25～40℃，反應時間為12～48h，使縮合成葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸偶聯物；

所述的普魯蘭多糖∶葉酸∶EDCI∶DMAP＝1∶0.1～1∶0.12～3∶0.05～1，摩爾比；

3)將反應物中滴加適量碳酸鈉緩沖液，透析24～48h以除盡游離葉酸，去離子水透析24～48h以除去其他小分子；

4)真空干燥或凍干，得黃色粉末；

二、透析法制備葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸納米粒

1)將葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸聚合物完全溶解于與水混溶的有機溶劑中，攪拌下用注射器加入適量水溶液，隨著水溶液的加入，逐漸形成有乳光的納米懸液；

有機溶劑為二甲基甲酰胺或二甲基亞砜；

所述水相為去離子水或10mM，pH7.4的PBS溶液；

葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸在有機溶劑中質量濃度為5～20mg/mL；

注射器針頭型號為4～6號；

攪拌轉速為800～1200rpm；

加入水溶液的量為有機溶劑量的1～4倍；

2)將納米混懸液轉入透析袋中，水溶液透析24～48h，以除去有機溶劑及其他小分子；

透析袋為截留分子量為8000～14000Da的透析袋；

所述水相為去離子水或10mM，pH7.4的PBS溶液；

三、葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸納米粒的交聯

1)將葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸納米粒溶液的pH調至弱堿性，在無氧環境中加入催化量的DTT，攪拌反應12～24h；

弱堿性環境的pH范圍為7.4～8.8；

無氧環境為真空條件或氮氣保護；

所述催化量的DTT為納米粒中硫辛酸摩爾量的7～10％；

2)將反應完全的納米粒溶液裝入透析袋中，弱堿性水溶液中透析12～24h；

透析袋為截留分子量8000～14000Da的透析袋；

所述水相為10mM的PBS溶液或10mM的硼酸緩沖溶液；

弱堿性水溶液的pH范圍為7.4～8.8。

4.一種具有雙靶向性的氧化還原敏感性核交聯普魯蘭多糖包載藥物納米粒，其特征在于它是以葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸納米粒為載體，物理包埋抗腫瘤藥物；

所述的抗腫瘤藥物與葉酸-普魯蘭多糖-硫辛酸偶聯物的質量比為1～5∶20；

所述的載藥納米粒平均粒徑為120～500nm，電位為-10～-30mV；

5.如權利要求4所述的包載藥物納米粒的制備方法，其特征在于將抗腫瘤藥物與載體材料溶于能和水混溶的有機溶劑中，攪拌下注入水相，透析除去有機溶劑及游離的藥物。