[發(fā)明專利]CD19靶向性的嵌合抗原受體及其制法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610895263.2
• 申請(qǐng)日: 2016-10-13
• 公開（公告）號(hào): CN107936120B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚意弘;朱侍貴;姚昕;李志遠(yuǎn);何佳平;朱蔚;朱琳;王慶霞;林南靜;張莉;黃家琪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海賽比曼生物科技有限公司;無錫賽比曼生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 陳詳;劉妍珺

本發(fā)明公開了一種優(yōu)化的嵌合抗原受體及其基因和重組表達(dá)載體、工程化CD19靶向性的T細(xì)胞及其應(yīng)用，所述嵌合抗原受體由CD19ScFv、CD8的鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)、CD137的胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域和CD3ζ的胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域串聯(lián)構(gòu)成。采用本發(fā)明的嵌合抗原受體CD19ScFv?CD8?CD137?CD3ζ修飾的T細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)CD19陽性靶細(xì)胞具有很好的特異殺傷活性，且比對(duì)照的已知的CD19靶向性的T細(xì)胞有更強(qiáng)的功能和更高的活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及CD19靶向性的嵌合抗原受體及其制法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

CD19分子是B淋巴細(xì)胞表面發(fā)揮特異性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體，存在于B細(xì)胞成熟的各個(gè)階段，在B祖細(xì)胞階段出現(xiàn)并穩(wěn)定持續(xù)地表達(dá)。CD19作為B細(xì)胞系特異的細(xì)胞表面分化抗原，僅表達(dá)于前B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞表面，而在造血干細(xì)胞、漿細(xì)胞和其他正常組織細(xì)胞中不表達(dá)。而且，CD19分子在膜上比較暴露，容易接近，與單克隆抗體結(jié)合后無顯著內(nèi)化及脫落，也不會(huì)因?yàn)榕c抗體的結(jié)合而發(fā)生抗原調(diào)變,故CD19是最可靠的B細(xì)胞表面的生物標(biāo)志物一。CD19通過B細(xì)胞受體調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)，其在B細(xì)胞的發(fā)育、增殖和分化以及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。此外，近期關(guān)于癌基因MYC基因如何推動(dòng)B淋巴細(xì)胞惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展的研究，發(fā)現(xiàn)CD19對(duì)穩(wěn)定Myc蛋白來說是絕對(duì)必要的，當(dāng)Myc基因是穩(wěn)定的，并處于較高水平時(shí)，Myc基因會(huì)促使癌癥發(fā)展，并且，Myc蛋白水平高的患者更可能死于淋巴瘤。CD19可能是控制Myc基因通路上的開關(guān)，而控制通斷開關(guān)可能代表了治療淋巴細(xì)胞腫瘤的有力工具。基于以上現(xiàn)象，故CD19成為治療CD19陽性B細(xì)胞惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展的細(xì)胞的一個(gè)重要靶點(diǎn)。CD19在大多數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤(如DLBCL、FL和套細(xì)胞淋巴瘤)、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病和一部分急性骨髓性白血病中都有高水平的表達(dá)。而CD19在造血干細(xì)胞、漿細(xì)胞及其他人體正常組織均不表達(dá)，因此CD19的靶向治療不會(huì)與其他正常組織組織發(fā)生交叉反應(yīng)，主要副作用是B細(xì)胞缺乏。目前抗CD19特異抗體Blinatumomab已獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)或難治性費(fèi)城染色體陰性B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病。針對(duì)CD19的CAR T細(xì)胞治療也在B細(xì)胞惡性腫瘤的臨床研究獲了良好的療效。因此，CD19在臨床實(shí)踐中已被證明是治療B細(xì)胞性血液腫安全、有效的靶點(diǎn)。

細(xì)胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對(duì)從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法，來激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。本領(lǐng)域技術(shù)人員一直致力于開發(fā)新的細(xì)胞免疫療法，以提高細(xì)胞免疫療法的效果，并降低其副作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是優(yōu)化CD19靶向性的嵌合抗原受體及其制法和應(yīng)用。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種嵌合抗原受體(CAR)(序列)，所述嵌合抗原受體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(即，scFv)如下式所示：

V_L－V_H

其中，V_H為抗體重鏈可變區(qū)；V_L為抗體輕鏈可變區(qū)；“－”為連接肽或肽鍵。

在另一優(yōu)選例中，所述抗體重鏈可變區(qū)包括以下三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR：

SEQ ID NO.5所示的CDR1，

SEQ ID NO.6所示的CDR2，和

SEQ ID NO.7所示的CDR3。

在另一優(yōu)選例中，所述抗體重鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。

在另一優(yōu)選例中，所述抗體輕鏈可變區(qū)包括一下三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR：

SEQ ID NO.9所示的CDR1'，