[發(fā)明專利]一種細(xì)胞吞噬纖維粉塵的檢測方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610893367.X
• 申請日: 2016-10-13
• 公開（公告）號: CN106568700B
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張敏;朱麗瑾;武為;陳鈞強(qiáng);蔣兆強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種細(xì)胞吞噬纖維粉塵的檢測方法，其特征在于：采用無毒的細(xì)胞膜脂溶性熒光探針對細(xì)胞預(yù)處理，在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察獲得進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的纖維粉塵的顯示結(jié)果；

所述的無毒的細(xì)胞膜脂溶性熒光探針染在細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)上，進(jìn)入細(xì)胞膜后在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散，纖維粉塵進(jìn)入細(xì)胞膜的部分在熒光顯微鏡下觀察顯示為熒光，未進(jìn)入細(xì)胞膜的部分在熒光顯微鏡下觀察顯示為非熒光，從而檢測獲得細(xì)胞有無吞噬纖維粉塵的結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞吞噬纖維粉塵的檢測方法，其特征在于：所述的無毒的細(xì)胞膜脂溶性熒光探針采用DiD、DiO、DiI、DiR或者DiS的細(xì)胞膜脂溶性熒光探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞吞噬纖維粉塵的檢測方法，其特征在于：所述觀察是在普通熒光顯微鏡下或者倒置熒光顯微鏡下觀察。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞吞噬纖維粉塵的檢測方法，其特征在于：貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，將細(xì)胞膜脂溶性熒光探針溶解于DMSO溶液中配成5 mM儲存液，使用時通過稀釋使得探針溶液的濃度為1～5 μM，處理已培養(yǎng)的細(xì)胞2小時，再經(jīng)PBS沖洗后加入受試?yán)w維粉塵，經(jīng)過實驗要求的處理時間后PBS沖洗細(xì)胞表面，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞吞噬纖維粉塵的情況，獲得檢測結(jié)果。

5.根據(jù)權(quán)利要求1~4任一所述的一種細(xì)胞吞噬纖維粉塵的檢測方法的應(yīng)用，其特征在于：用于細(xì)胞吞噬能力檢測和藥物作用試驗。