[發明專利]一種零背景的平末端克隆載體pRI857及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201610892336.2
• 申請日: 2016-10-12
• 公開（公告）號: CN107937426A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 汪洋;張開;易軍;蘇會娟;楊慕晗
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/65;C12N15/66;C12N15/10;C40B50/06
• 代理公司: 南京理工大學專利中心32203
• 代理人: 劉海霞,朱顯國

1.一種零背景的平末端克隆載體pRI857，其特征在于，為利用PCR擴增重組質粒pUC-cI857中的Plac-cI857基因和重組質粒pBBR1MCS-PR中的P_R-Kan^R基因替換質粒pKV6中的AmpR和ermB-ermA基因，P_R-Kan^R基因，Plac-cI857基因與質粒pKV6中的dbl-colE1基因順序連接形成全長序列為SEQ ID NO.17的重組質粒；所述的重組質粒pBBR1MCS-PR，為利用PCR擴增質粒pCP20中的P_R啟動子基因替換pBBR1MCS-2質粒中的Kan^R的啟動子序列，形成全長序列為SEQ ID NO.15的重組質粒；所述的重組質粒pUC-cI857，為利用PCR擴增質粒pCP20中的cI857基因替換pUC19中的LacZa基因，形成全長序列為SEQ ID NO.16的重組質粒所述的cI857開放閱讀框上設計有BfrBI平末端酶切位點。

2.如權利要求1所述的零背景的平末端克隆載體pRI857的構建方法，其特征在于，利用PCR擴增質粒pCP20中的P_R啟動子序列來替換質粒pBBR1MCS-2中Kan^R基因的啟動子序列，形成重組質粒pBBR1MCS-PR；利用PCR擴增質粒pCP20中的cI857基因替換質粒pUC19中的LazZa基因，形成重組質粒pUC-cI857；通過合成引物PCR擴增質粒pBBR1MCS-PR中的P_R-Kan^R目的片段，質粒pUC-cI857中的Plac-cI857目的片段和質粒pKV6中的dbl-colE1目的片段，最后將P_R-Kan^R、Plac-cI857、dbl-colE1片段進行順序連接，得到零背景克隆載體pRI857。

3.如權利要求1所述的零背景的平末端克隆載體pRI857在基因克隆中的應用。

4.如權利要求1所述的零背景的平末端克隆載體pRI857在基因文庫構建中的應用。