[發明專利]參芪降糖制劑含量測定方法及其在整體質量控制中的應用

有效

• 申請號: 201610890089.2
• 申請日: 2016-10-12
• 公開（公告）號: CN106526002B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 張慧;張曉靜;顏繼忠;姜慧潔
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種參芪降糖制劑含量測定方法，其特征在于，所述方法測定的是參芪降糖制劑中10個活性成分的含量，所述的10個活性成分分別為：人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、黃芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙，所述方法包括如下步驟：

(1)制備混合對照品溶液

分別稱取對照品：人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、黃芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙，以甲醇為溶劑，配制成混合對照品溶液母液；

(2)制備內標物標準溶液

稱取內標物丹參酮IIA，以甲醇為溶劑，配制成內標物標準溶液；

(3)制備供試品溶液

將參芪降糖制劑粉碎，稱取粉碎后的參芪降糖制劑粉末與甲醇混合，超聲提取，提取液減壓蒸除溶劑，得到浸膏；將所得浸膏加水溶解，再用水飽和正丁醇溶液萃取，收集萃取液減壓蒸除溶劑，冷凍干燥，得到參芪降糖制劑提取物；以甲醇為溶劑，配制所得參芪降糖制劑提取物溶液，離心，取上清液，過微孔濾膜，得到供試品溶液；

(4)供試品檢測

采用HPLC-Q-MS儀器，在步驟(3)制備的供試品溶液中加入步驟(2)制備的內標物標準溶液，進樣檢測，得到供試品的質譜圖；

所述HPLC-Q-MS儀器的工作參數條件如下：

液相色譜分離條件為：色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，粒徑≤5μm，流動相A為乙腈，流動相B為體積分數0.1％的甲酸水溶液，采用梯度洗脫，柱溫30℃，流速1.0mL/min，進樣體積20μL，檢測波長為203nm；

單四級桿質譜條件為：采用ESI電噴霧離子源，電壓：3000V，霧化室溫度350℃，干燥氣流速12.0L/min，正離子模式，SIM離子監測模式，開啟離子監測通道1、離子監測通道2；

液相色譜分離梯度洗脫的洗脫溶劑按如下時間順序進行，表中的百分號的含義為體積百分數：

；

(5)繪制標準曲線

取步驟(1)配制的混合對照品溶液母液，按照不同濃度梯度稀釋成若干份混合對照品溶液試樣，在每份混合對照品溶液試樣中加入步驟(2)制備的內標物標準溶液，然后采用HPLC-Q-MS儀器，按照步驟(4)中的工作參數條件進行檢測，得到混合對照品的質譜圖；以混合對照品中各個單一對照品各自的進樣濃度為橫坐標，質譜圖中各個單一對照品各自對應的峰面積與內標物峰面積的比值為縱坐標，繪制標準曲線，進而得到線性回歸方程，即分別得到對照品人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、黃芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙的標準曲線與線性回歸方程；

(6)供試品含量檢測結果

將步驟(4)測得的供試品質譜圖中各個活性成分化合物各自相應峰面積與內標物峰面積的比值代入步驟(5)中得到的各對照品的線性回歸方程，計算得到供試品溶液中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、黃芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙的含量，進而計算得到參芪降糖制劑中10種活性成分的含量。

2.如權利要求1所述的參芪降糖制劑含量測定方法，其特征在于，所述的參芪降糖制劑為片劑、膠囊劑或顆粒劑。

3.如權利要求1所述的參芪降糖制劑含量測定方法，其特征在于，步驟(1)中，所配制的混合對照品溶液母液中，人參皂苷Rb1的終濃度為99.3325μg/mL、人參皂苷Rc的終濃度為109.2657μg/mL、人參皂苷Rd的終濃度為141.0522μg/mL、人參皂苷Rg1的終濃度為152.5747μg/mL、人參皂苷Re的終濃度為224.4914μg/mL、黃芪甲苷的終濃度為52.4476μg/mL、五味子甲素的終濃度為42.9116μg/mL、五味子乙素的終濃度為55.6262μg/mL、五味子醇甲的終濃度為55.6262μg/mL、五味子醇乙的終濃度為127.1456μg/mL。

4.如權利要求1所述的參芪降糖制劑含量測定方法，其特征在于，步驟(2)中，所配制的內標物標準溶液中，丹參酮IIA的濃度為80μg/mL。