[發明專利]羊乳蛋白質組比對方法

有效

• 申請號: 201610882667.8
• 申請日: 2016-10-10
• 公開（公告）號: CN106645604B
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 翁秀秀;李發弟;樂祥鵬;李萬宏;劉欣欣
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: G01N33/04
• 分類號: G01N33/04;G01N1/28
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 李濤

本發明提供了一種羊乳蛋白質組比對方法，所述方法包括：a.奶樣采集；b.溶液配制；c.脫脂乳蛋白樣品的制備；d.樣品蛋白質濃度測定：用BCA試劑盒，PBS為空白，以5.0mg/mL BSA為標準蛋白，在波長為560nm下用酶標儀上測定樣品蛋白OD值，獲得初乳脫脂乳蛋白樣品和常乳脫脂乳蛋白樣品的蛋白質濃度；e.二維凝膠電泳：依次經過等電聚焦電泳操作、膠條平衡、SDS?PAGE垂直凝膠電泳和膠圖采集與分析，得到所述初乳奶樣和所述常乳奶樣的2?DE圖譜。本申請提供的羊乳蛋白組比對方法，能夠實現同時大量分析某一生物體系的蛋白組成，為系統揭示羊乳蛋白質組隨泌乳階段的變化規律提供理論依據。

技術領域

本發明涉及生物學領域，具體而言，涉及一種羊乳蛋白質組比對方法。

背景技術

羊奶具有比牛奶更高的營養價值，與母乳成分更為相似，可以作為牛奶不耐受嬰幼兒的良好乳源。

初乳是母畜分娩后1周、特別是3天內所分泌的乳汁。初乳中含有的蛋白質、脂肪和維生素等含量顯著高于常乳，特別是初乳中含有比常乳更多的具有特殊功能的蛋白質，如免疫球蛋白、血液補體系統蛋白、急性期蛋白、具有直接抗菌作用的蛋白和多肽以及生物活性蛋白等。它們在促進幼畜胃腸道發育、抵抗病原體等方面具有重要的作用。

有研究發現，初乳中IgG、IgA、IgM和總蛋白含量活性很高，其含量隨著產后時間的延長而急劇變化。然而這些研究都是采用傳統的生物化學方法解析初乳和常乳的蛋白豐度變化，分析手段有限，缺乏從乳蛋白整體進行系統的研究。近年來，隨著蛋白質組學研究方法和技術的發展，提供了一種從蛋白表達水平揭示生命活動規律的新思路，為系統研究乳蛋白提供了強有力的研究手段。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種羊乳蛋白質組比對方法。

通過構建綿羊乳蛋白質的雙向電泳體系，建立一種基于2-DE技術鑒別綿羊初乳和常乳的方法，為系統揭示綿羊乳蛋白質組隨泌乳階段的變化規律提供理論依據。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種羊乳蛋白質組比對方法，所述方法包括：

a.奶樣采集：隨機選擇多只胎次相同、預產期相近母羊，分別采集得到初乳奶樣和常乳奶樣，保存備用；

b.溶液配制：

使用尿素、硫脲、CHAPS和超純水配制水化上樣緩沖液；

使用尿素、SDS、Tris-HCl、甘油和超純水配制膠條平衡緩沖液母液；

使用所述膠條平衡緩沖液母液，添加DTT配制膠條平衡緩沖液I；

使用所述膠條平衡緩沖液母液，添加碘乙酰胺配制膠條平衡緩沖液II；

使用低熔點瓊脂糖、Tris、甘氨酸、SDS、溴酚藍和超純水配制低熔點瓊脂糖封膠液；

使用丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和超純水配制質量分數為30％的聚丙烯酰胺溶液；

使用Tris堿、超純水和鹽酸配制1.5mol/L Tris-HCl緩沖液和1mol/LTris-HCl緩沖液；

使用SDS和超純水配制質量分數為10％的SDS溶液；

使用APS和超純水配制質量分數為10％的APS溶液；

使用Tris堿、甘氨酸、SDS和蒸餾水制備1×TBE電泳緩沖液；

使用所述10％的SDS溶液、溴酚藍、50％甘油、DTT、Tris-HCl制備5×上樣緩沖液；

使用乙醇、乙酸和加超純水制備卡諾氏固定液；