[發明專利]免疫親和柱凈化-超高效液相色譜-串聯質譜檢測魚蝦中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的方法

有效

• 申請號: 201610881818.8
• 申請日: 2016-10-09
• 公開（公告）號: CN107037139B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 李佩佩;張小軍;嚴忠雍;陳思
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 33109 杭州杭誠專利事務所有限公司
• 代理人: 尉偉敏;趙越劍<國際申請>=<國際公布>

1.一種免疫親和柱凈化-超高效液相色譜-串聯質譜檢測魚蝦中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)樣品處理：稱取勻質好的樣品5g置于50mL具塞離心管中，加入10mL 2mol/L HCl溶液，渦旋振蕩1min后置于氣浴恒溫振蕩器中60℃恒溫酸解30min，冷卻至室溫后，8000r/min離心5min，移取上清液至50mL離心管中，殘渣中加入10mL 2mol/L HCl溶液重復提取一次，合并提取液并用水定容至25mL，混勻后用定量濾紙過濾，準確移取過濾后的提取液5mL先用4.0mol/L NaOH溶液，調pH至7～8，得樣品液；

(2)免疫親和柱凈化：取出免疫親和柱，待回至室溫后去掉免疫親和柱堵頭，放出柱內保存液，上樣品液，以1滴/2s的速度過免疫親和柱，上樣結束后，先后用4mL PBS溶液和4mL水淋洗親和柱，擠干柱內殘留液，棄去以上全部流出液，用4mL 2％的乙酸-甲醇溶液洗脫目標物，洗脫液于50℃水浴氮氣吹干，加入1mL初始流動相溶解殘渣得凈化液；

(3)液相色譜-質譜分析：凈化液經0.22μm濾膜過濾后供液相色譜-串聯質譜儀測定獲得3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的峰面積，將峰面積代入標準曲線分析計算，從而獲得樣品中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的含量；

色譜條件為：色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱，規格：50mm×2.1mm，1.7μm；進樣量10μL；樣品室溫度10℃，柱溫40℃；流動相：A為體積百分比濃度為0.1％甲酸溶液，B為甲醇，梯度洗脫程序如下：0～3min，90％～10％A；3～4min，10％～90％A；4～5min，A保持90％不變；流速：0.3mL/min；

質譜條件為：電噴霧離子源；正離子掃描模式；多反應監測檢測方式；毛細管電壓：3.5kV；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣溫度：380℃；錐孔氣為高純氮氣，流量：50L/h；脫溶劑氣為高純氮氣，流量：600L/h，母離子為188.9，子離子為142.9、144.9。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中初始流動相為0.1％甲酸-甲醇溶液，0.1％甲酸溶液∶甲醇溶液的體積比＝9∶1。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中標準曲線的制作方法為：配制濃度為1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L和50.0μg/L的標準工作溶液，以3-甲基-喹噁啉-2-羧酸濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，制作標準曲線。