[發明專利]護理點測定法

在審

• 申請號: 201610878590.7
• 申請日: 2016-09-30
• 公開（公告）號: CN107884572A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: D·A·安德森;M·L·加西亞;H·范;張志美
• 申請（專利權）人: 南京澳百生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/573;G01N33/576
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司72002
• 代理人: 王健

技術領域

說明書的領域是護理點測試，并且更具體是用于鑒定受試者中的異常酶水平或異常肝功能的測定法和試劑盒。還提供了篩選測定法。

背景技術

在說明書的末尾還列出了本說明書中的參考文獻的書目詳情。

參考本說明書中的任何現有技術不是并且不應理解為承認或以任何形式提出此種現有技術在任何國家形成常見的公知常識。

肝疾病或肝炎是全球的主要衛生保健負擔。肝疾病可以由病毒(包括甲肝、乙肝、丙肝、丁肝和戊肝病毒)或其它感染，或者由藥物毒性(包括過度飲酒，和用于治療疾患，如人免疫缺陷病毒或肺結核感染的藥物)，或者經由異常代謝過程(包括非酒精脂肪肝疾病[NAFLD]和非酒精脂肪肝炎[NASH])引起。例如，超過3.6億人患有慢性乙肝并且超過2億人患有慢性丙肝，高風險的持續肝疾病導致肝纖維化、硬化和肝細胞癌，同時升高的肥胖水平已經導致NASH流行性的大幅增加，現在估計影響超過全球人口的25％(Younossi等人，2016)。肝疾病也是管理先兆子癇中的主要問題，其中需要監測母體中的肝功能以允許在可能的最大孕齡時，但是在肝疾病變得過于嚴重(在此處它會危及母體和嬰兒兩者的健康)前誘導或手術分娩新生兒。

有效的藥物正變得更為廣泛可用于治療乙肝和丙肝，并且可以用針對抗體或抗原的血清學測試和/或針對病毒DNA或RNA的分子測試確定諸如HBV或HCV等感染的存在。用于諸如NAFLD和NASH 等疾患的許多療法也在開發中，而新生兒的即時分娩在先兆子癇中可以是有效的。然而，有效使用這些藥物、療法和干預的主要障礙是鑒定具有最高健康風險并且最需要治療或干預的那些患者，因為肝疾病呈現非特異性體征和癥狀并且不能僅根據臨床檢查診斷。

最方便地，通過對血液或血漿進行的生物化學測試以檢測異常量的肝特異性酶如丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)或γ谷氨酰胺轉移酶(GGT)，或代謝物如膽紅素的存在來檢測并診斷肝疾病。使用ALT作為實例，人ALT1同種型主要在肝的肝細胞的胞質區室中表達，并且肝疾病期間對肝細胞的破壞導致可溶性ALT釋放到血漿中，在那里其酶活性可以使用多種生物化學測試測定方法測量。在這些方法中，ALT的酶活性將底物轉化為產物，并且儀器測量底物或產物的顏色、吸光度或熒光的變化以計算樣品中存在的ALT濃度。然后，將此濃度與在測試條件和研究的群體下預期的“正?！?、健康水平比較。這些方法是本領域中公知的并且在可以使用全血、血漿或血清作為樣品的各種自動化和半自動化分析儀器中可用。也已經描述了ALT測試，其中可以在不需要儀器的情況下在POC裝置中檢測底物的可視顏色反應，但是此測試的視覺動態范圍限制它對鑒定具有高度升高的ALT水平(正常上限的>3倍，或120IU/L)的樣品的有用性(Pollock等人2012)。一種更優選的測試將能夠相對于由歐洲肝研究協會(European Association for the Study of the Liver，EASL)推薦的邊界值區分樣品，該歐洲肝研究協會推薦40IU/L的上限用于管理慢性乙肝和其它疾患。

然而，這些方法的主要限制是普遍需要用于兩種目的的儀器；(a)在固定溫度下進行酶促反應，因為酶活性是高度溫度敏感的，和(b)在準確的時間時或者在提供精確測量的動力學條件下測量酶促產物。

在ALT的情況下的進一步限制是人存在第二同種型ALT2，其在肌肉組織中較為豐富，但是從受損的細胞中同樣釋放，例如在肢體鍛煉或心臟衰竭后，導致血液、血漿或血清中的酶活性水平升高，這可以導致肝疾病的誤診。

因此，對肝功能或疾病測試存在著未得到滿足的需要，所述肝功能或疾病測試可適用于在護理點(POC)處或POC附近使用，以擴大肝功能測試用于全球資源不足的環境，以及甚至在資源豐富的環境中方便用于臨床的使用機會。我們在這里特別描述了新的方法，其已經允許使用完善建立的側向流免疫層析技術開發針對ALT1作為肝疾病生物標志物的POC測試。這些方法一般會適用于在護理點處測量需要的針對其它肝酶和其它酶和代謝物的測試。

發明內容