[發明專利]一種吉他霉素化學發光酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201610877176.4
• 申請日: 2016-09-30
• 公開（公告）號: CN107677660B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 谷正;趙凱;劉芳;許晨;李健;李云龍
• 申請（專利權）人: 廈門中集信檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種吉他霉素化學發光酶聯免疫檢測試劑盒用于檢測豬或禽類的動物性食品中吉他霉素藥物殘留量的用途，其特征在于，所述試劑盒包括盒體、設在盒體內的酶標板和設在盒體內的試劑；

所述酶標板選擇乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光酶標板，酶標板的各孔包被有以吉他霉素與卵清蛋白偶聯制成的包被抗原，所述包被抗原濃度優選1.0μg/mL；所述的包被溶液為：1.75g碳酸鈉和2.72g碳酸氫鈉溶于1L水中，并調節pH為9.5后制得；所述酶標板采用將吉他霉素藥物-卵清蛋白偶聯物置于設定的包被溶液中，在37℃恒溫箱中反應包被，包被液采用的是pH-9.5的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液；采用的包被抗原濃度為1.0μg/mL，包被好的微孔板可以用封閉溶液封閉，封閉溶液為：10g卵清蛋白溶于1L洗滌溶液中，再加入重量百分比為0.02％的NaN₃后制得；

所述設在盒體內的試劑包括：吉他霉素單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體、吉他霉素系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學發光液；

所述吉他霉素單克隆抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的序列結構分別為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；所述吉他霉素單克隆抗體用洗滌溶液稀釋成1：50000的工作濃度；具體而言，SEQ ID NO.1為EVKVEESGGGLVQPGGIVSPQGFKDEWCLLTLPMNWVRQSPEKGYYPMSRMRHCNGHSVTQLNTKAKGRFTMSRDDSKSSVYLQMSHMCMNMMNRQQCTSIYYDNLYYAMDYWGQGTSVTVSS，SEQ ID NO.2為DILMTQSPASLSASVGHINWPCIGNLCSPSCYLAWYQQKQGKSPQLLVYYAKTLLFNNPITKYDMCLVERIAPSLKINSLRPCTGIWKMCWPLEVITFGGGTKLEIKR；

所用辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗體為辣根過氧化酶-羊抗鼠IgG原液，使用時用洗滌溶液配制成1：6000的工作濃度；

所述吉他霉素系列標準溶液從吉他霉素純品中稀釋得到，所用稀釋液為含有10％甲醇的0.05mmol/L、pH-7.5的PBS，吉他霉素標準品濃度分別是0μg/L，0.1μg/L，0.5μg/L，1.0μg/L，5μg/L和10μg/L，所述百分比為體積百分比；

所述濃縮磷酸鹽緩沖液由5.24g NaH₂PO₄·2H₂O和33.6g Na₂HPO₄·12H₂O溶于1L去離子水中制得；

所述濃縮洗滌液為按體積百分比在0.05％，pH為7.4，濃度為0.1mol/L的鹽緩沖液中添加0.05％的吐溫-20后制得；

所述化學發光溶液包括A液和B液，其中，A液為：魯米諾0.02M、對甲苯酚0.002M，PH-8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；B液為100mL含2.0g檸檬酸、2.35g無水Na₂HPO₄和0.70mL濃度0.75％的過氧化脲的溶液。