[發明專利]一種基于萜類的煙草代謝組學中新鮮煙葉樣品質量的判別方法

有效

• 申請號: 201610868641.8
• 申請日: 2016-09-30
• 公開（公告）號: CN106324145B
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 陳霞;鄭慶霞;周會娜;金立鋒;李鋒;徐國云;張慧;李澤鋒;王燃;魏攀
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 郭中民;許延麗

1.一種基于萜類的煙草代謝組學中新鮮煙葉樣品質量的判別方法，其特征在于：通過檢測新鮮煙葉中植醇和角鯊烯含量，計算其比值，采用氣相色譜串聯質譜GC-MS對代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品中植醇和角鯊烯進行絕對定量分析；具體判別方法如下：

a、稱取10~25g的凍干研磨煙葉樣品，加入作為提取溶劑的正己烷0.75~1.5 mL，室溫下超聲提取30min，離心，將上清液轉移到樣品瓶中，并用氮氣吹干；提取后的殘渣加入0.6~1.2mL由甲醇和氫氧化鉀溶液按4:1的體積比組成的混合液，70℃下振蕩提取30min，離心，將上清液轉移到Eppendorf管中；加入0.5~1.0mL正己烷，進行萃取；渦旋6 s，離心1 min；之后轉移到上述樣品瓶中，并用氮氣吹干；衍生化：加入50~100μL 20mg/mL甲氧胺鹽酸鹽-吡啶溶液，40~60℃反應60~90分鐘，再加入50~100 μL N-甲基-N-(三甲基硅基)三氟乙酰胺溶液，在40~60℃條件下反應30~90分鐘，進GC/MS分析，采用保留時間和選擇離子（SIM）模式定性，檢測萜類物質的含量；分析步驟如下：GC-MS分析數據可定性新鮮煙葉中的植醇和角鯊烯，通過繪制標準曲線可對所測得的植醇和角鯊烯進行絕對定量，將植醇和角鯊烯含量的比值作為區分代謝組學合格樣品及變質的不合格樣品的標準，即待測樣品中植醇和角鯊烯含量的比值在120以上的為合格樣品，可用于代謝組學分析，植醇和角鯊烯含量的比值在120以下的為變質的不合格樣品，不可用于代謝組學分析；

b、GC/MS分析方法的氣相色譜參數：色譜柱：DB-35MS，規格為：30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm d.f. ；程序升溫：起始溫度60℃（3 min），25℃/min的速度升至210℃，0.8℃/min的速度升至220℃，15℃/min的速度升至310℃（13min）；載氣：氦氣；柱流速：1.0 mL/min；進樣口溫度：250℃；進樣量 2 μL，分流進樣，分流比 10:1；

c、GC/MS分析方法的質譜參數：電離電壓：70 ev；離子源溫度：250 ℃；傳輸線溫度：280℃；定量離子對如下：法尼醇（135>107），葉綠醇（123>87），氘代十八烷酸（IS）（376>136），α-西柏三烯二醇（156>141），β-西柏三烯二醇（156>141），角鯊烯（149>107），環氧化鯊烯（135>107），膽固醇（329>121），菜油甾醇（255>173），豆甾醇（255>173），谷甾醇（396>255），香樹脂醇（218>203）。

2.根據權利要求1所述的判別方法，其特征在于：所述提取溶劑中添加有5~20μL 2mg/mL內標氘代十八烷酸。

3.根據權利要求1所述的判別方法，其特征在于：所述凍干研磨煙葉樣品為由大田采摘的新鮮煙葉樣品置于-196℃液氮罐保存運輸，液氮冷凍研磨，低溫凍干，-80℃冰箱保存待用的煙葉末。