[發(fā)明專利]一種磁性固相萃取結(jié)合同位素二甲基化標(biāo)記分析磺胺類物質(zhì)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610867566.3
• 申請(qǐng)日: 2016-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106645449B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳明火;粟靖云;占敬敬;胡玉峰;龔勛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 大連理工大學(xué)專利中心 21200
• 代理人: 梅洪玉;潘迅

本發(fā)明提供一種磁性固相萃取結(jié)合同位素二甲基化標(biāo)記分析磺胺類物質(zhì)的方法，該方法采用磁性碳納米顆粒為萃取材料，將該材料分散于含磺胺的樣品溶液中，通過(guò)固相萃取將樣品中的磺胺類化合物富集到磁性碳納顆粒料表面。對(duì)吸附于材料表面的磺胺類化合物原位進(jìn)行二甲基標(biāo)記，對(duì)標(biāo)記后的樣品進(jìn)行洗脫收集，并用液相色譜?質(zhì)譜法(LC?MS)進(jìn)行分析，得到結(jié)果。本發(fā)明的有益效果為發(fā)展了一種磁性納米球上二甲基化標(biāo)記結(jié)合LC?MS定量分析水中痕量磺胺類化合物的新方法；且該方法操作簡(jiǎn)便，分析速度快，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)環(huán)境介質(zhì)中存在的痕量磺胺類物質(zhì)的準(zhǔn)確定量分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及對(duì)磺胺類化合物的定性及定量分析新方法，該方法主要基于對(duì)吸附在磁球表面磺胺類化合物原位進(jìn)行穩(wěn)定同位素二甲基化標(biāo)記，使每一種磺胺化合都有相應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)物，實(shí)現(xiàn)用LC-MS對(duì)所有的磺胺類目標(biāo)物進(jìn)行準(zhǔn)確定性及定量。

背景技術(shù)

磺胺類化合物是含有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類化合物的總稱，是應(yīng)用最早的一類人工合成抗菌藥物。由于該藥物具有抗菌譜廣、價(jià)格低廉、性質(zhì)穩(wěn)定等諸多優(yōu)點(diǎn)，無(wú)論在臨床還是獸藥領(lǐng)域，該藥物均有著極其廣泛的應(yīng)用。但由于磺胺類藥物在預(yù)防和治療過(guò)程中的不規(guī)范使用，許多動(dòng)物源性食品常存在該類藥物的殘留。磺胺類藥物具有致過(guò)敏、抑制體內(nèi)酶活性、引起腸內(nèi)菌群失調(diào)等副作用，殘留于環(huán)境介質(zhì)中具有很大的風(fēng)險(xiǎn)性。

目前在復(fù)雜基質(zhì)中磺胺類藥物及其代謝物的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)取得很大進(jìn)展，主要借助于靈敏度較高的分析儀器，如液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)法等。在LC-MS中，用同位素內(nèi)標(biāo)對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定量分析是最簡(jiǎn)單且準(zhǔn)確的方法，但因?yàn)橥凰貎?nèi)標(biāo)難以獲得且價(jià)格較高，通常只適合少數(shù)目標(biāo)物的分析。但磺胺類化合物屬一大類物質(zhì)，用同位素內(nèi)標(biāo)法對(duì)這些目標(biāo)物同時(shí)進(jìn)行定量分析難以實(shí)現(xiàn)。另外，二甲基化標(biāo)記法作為一種基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記的定量方法，已被廣泛應(yīng)用于定量蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域，該方法可對(duì)氨基進(jìn)行衍生，將氨基上的兩個(gè)氫轉(zhuǎn)化為兩個(gè)甲基，從而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。本發(fā)明首次將二甲基標(biāo)記法引入到磺胺類化合物的分析中，對(duì)該類化合物中苯環(huán)上的氨基進(jìn)行衍生，通過(guò)與氫代和氘代的甲醛試劑反應(yīng)，可對(duì)所有磺胺類化合物進(jìn)行標(biāo)記，得到其相應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)物。該法可實(shí)現(xiàn)對(duì)磺胺類化合物的快速、準(zhǔn)確定量分析。

磁性碳納米粒子作為一種磁性固相萃取材料因分離速度快且吸附性能好，在分析化學(xué)樣品前處理中日益受到人們的關(guān)注。因環(huán)境樣品復(fù)雜且目標(biāo)物濃度低，本發(fā)明中首次將磁性碳納米材料應(yīng)用于磺胺類化合物的預(yù)富集，通過(guò)對(duì)吸附在該材料表面的磺胺原位進(jìn)行二甲基標(biāo)記，標(biāo)記完成后進(jìn)行洗脫收集，用于LC-MS分析。磁性固相萃取結(jié)合原位二甲基標(biāo)記可解決因樣品量大、目標(biāo)分析物濃度低和雜質(zhì)干擾過(guò)多所引起的標(biāo)記效率過(guò)低和標(biāo)記試劑用量過(guò)大的問(wèn)題，極大提高了二甲基化的標(biāo)記效率，節(jié)省了標(biāo)記試劑用量，實(shí)現(xiàn)了對(duì)磺胺類化合物的快速準(zhǔn)確分析，同時(shí)也擴(kuò)寬了傳統(tǒng)二甲基化標(biāo)記的應(yīng)用范圍。

綜上所述，本發(fā)明發(fā)展一種磁性納米球上二甲基化標(biāo)記結(jié)合LC-MS定量分析水中痕量磺胺類化合物的新方法。該方法操作簡(jiǎn)便，分析速度快，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)環(huán)境介質(zhì)中存在的痕量磺胺類物質(zhì)的準(zhǔn)確定量分析。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于建立一種磁球表面原位對(duì)所吸附的磺胺進(jìn)行二甲基化標(biāo)記，并結(jié)合LC-MS法分析復(fù)雜基質(zhì)中痕量磺胺的新方法。本發(fā)明所使用的磁性碳納米材料對(duì)磺胺類物質(zhì)具有良好的吸附性能。磁球上二甲基化標(biāo)記方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和、可控，通過(guò)控制反應(yīng)條件可以實(shí)現(xiàn)對(duì)磺胺類物質(zhì)的高效標(biāo)記(標(biāo)記效率>99％)。再結(jié)合LC-MS可以實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境介質(zhì)中痕量磺胺類藥物的準(zhǔn)確定量。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種磁性固相萃取結(jié)合同位素二甲基化標(biāo)記分析磺胺類物質(zhì)的方法，采用磁性碳納米材料為萃取材料，將該材料分散于含磺胺的樣品溶液中，通過(guò)固相萃取將樣品中的磺胺類化合物富集到磁性碳納米材料表面。對(duì)吸附于材料表面的磺胺類化合物原位進(jìn)行二甲基標(biāo)記，對(duì)標(biāo)記后的樣品進(jìn)行洗脫收集，并用液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)進(jìn)行分析。具體操作過(guò)程可選用兩種方法，其具體步驟如下：