[發(fā)明專利]一種通過(guò)點(diǎn)突變提高大片段嗜熱脂肪地芽孢桿菌DNA聚合酶活性的方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610865232.2
• 申請(qǐng)日: 2016-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106399299B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李杉;王菊芳;馬毅;張蓓蕾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12N9/12;C12N15/54;C12Q1/48
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

1.一種通過(guò)點(diǎn)突變提高大片段嗜熱脂肪地芽孢桿菌DNA聚合酶活性的方法，其特征在于是通過(guò)酶切連接將野生型Bst DNA聚合酶基因克隆到原核表達(dá)載體上，并通過(guò)RF克隆技術(shù)對(duì)氨基酸G310或D540進(jìn)行點(diǎn)突變構(gòu)建突變體，并轉(zhuǎn)入原核表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)，純化；

所述的野生型Bst DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的突變體為G310L、G310A或D540E；

所述的突變體G310L的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述的突變體G310A的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；

所述的突變體D540E的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過(guò)點(diǎn)突變提高大片段嗜熱脂肪地芽孢桿菌DNA聚合酶活性的方法，其特征在于：

編碼野生型Bst DNA聚合酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過(guò)點(diǎn)突變提高大片段嗜熱脂肪地芽孢桿菌DNA聚合酶活性的方法，其特征在于：

所述的突變體G310L的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述的突變體G310A的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

所述的突變體D540E的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。

4.一種突變體G310L，其特征在于：所述的突變體G310L的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

5.一種突變體G310A，其特征在于：所述的突變體G310A的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

6.一種突變體D540E，其特征在于：所述的突變體D540E的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

7.權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的通過(guò)點(diǎn)突變提高大片段嗜熱脂肪地芽孢桿菌DNA聚合酶活性的方法在提高大片段嗜熱脂肪地芽孢桿菌DNA聚合酶活性中的應(yīng)用。