[發明專利]雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法有效
| 申請號： | 201610864434.5 | 申請日： | 2016-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN106282379B | 公開（公告）日： | 2019-10-01 |
| 發明（設計）人： | 文秦超;荊慧芳;黎樹;張修月;宋昭彬 | 申請（專利權）人： | 四川大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 成都環泰知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51242 | 代理人： | 鄒翠;李斌 |
| 地址： | 610065 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 黃顙魚 瓦氏黃顙魚 酶切鑒定 限制性核酸內切酶 雜交 分子生物學 方法分析 基因片段 酶切位點 序列差異 雜交子代 測序 酶切 種間 鑒別 直觀 | ||
1.雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法，其特征在于，利用PCR擴增后的CH4基因片段在黃顙魚和瓦氏黃顙魚之間具有種間序列差異，以限制性核酸內切酶HindⅢ進行酶切，酶切位點為A↓AGCTT，采用RFLP方法分析鑒別黃顙魚、瓦氏黃顙魚及其雜交子代；
具體包括以下步驟：
A、取待測魚的組織樣本，提取基因組DNA；
B、以提取到的基因組DNA為模板，在專用引物的引導下進行PCR擴增；
C、對擴增出的目的基因片段采用限制性核酸內切酶HindⅢ進行酶切，酶切位點為A↓AGCTT；
D、瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR-RFLP產物，經電泳檢測，在同一個泳道上只有一條帶，為瓦氏黃顙魚；在同一泳道上有兩條帶，為黃顙魚；在同一泳道上有三條帶，為雜交種；
所述B步驟中的專用引物為CH4基因片段專用引物，引物對為：
正向引物 5’-TCCCCAAGGTTTACTTGCTCGCTCC-3’；
反向引物 5’-CGATGGATCTGGATATGTGGCGCAC-3’。
2.根據權利要求1所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法，其特征在于，在一個泳道上同時出現長度為300bp、140bp和160bp的三條DNA標記條帶的，為瓦氏黃顙魚和黃顙魚的雜交種。
3.根據權利要求1所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法，其特征在于，采用所述專用引物擴增得到黃顙魚的CH4基因片段的核苷酸序列為SEQID NO:1。
4.根據權利要求1所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法，其特征在于，采用所述專用引物擴增得到瓦氏黃顙魚的CH4基因片段的核苷酸序列為SEQID NO:2。
5.根據權利要求1所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法，其特征在于，所述的C步驟中，使用PCR儀進行酶切實驗，限制性酶切CH4基因片斷的步驟為：8μL CH4-PCR擴增產物，加入1-1.5μL酶切反應緩沖液，0.5-1μL限制性核酸內切酶HindⅢ，37℃酶切2.5h，酶切位點為A↓AGCTT。
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