[發明專利]用于檢測細胞角蛋白19片段的化學發光免疫試劑盒

有效

• 申請號: 201610863945.5
• 申請日: 2016-09-29
• 公開（公告）號: CN106483298B
• 公開（公告）日: 2017-08-11
• 發明（設計）人: 陳立國;鄒偉權;張亞麗;李慶祥;母潤紅;王濤;蘇焱
• 申請（專利權）人: 廣州華弘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙)11470
• 代理人: 劉曄

1.一種細胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)的定量測定試劑盒，其包含的試劑有Cyfra21-1磁分離試劑，酶標記的Cyfra21-1抗體溶液，標準品，洗滌液以及化學發光底物溶液；

所述Cyfra21-1磁分離試劑為含有1mg/ml的偶聯有抗Cyfra21-1單克隆抗體的磁性微球，0.4mg/ml的十八烷基三甲基氯化銨，0.2mg/ml的卵磷脂，0.1mg/ml的PEG200的50mmol/L的PBS緩沖液，pH值為7.4；

所述酶標記的Cyfra21-1抗體溶液是含有1mg/ml辣根過氧化酶標記的抗Cyfra21-1單克隆抗體和1mg/ml BSA的50mmol/L的PBS緩沖液，pH值為7.4；

所述的標準品為不同濃度的Cyfra21-1標準品溶液，其分別含有0、0.1、0.5、1、2、4、8和16ng/ml的Cyfra21-1標準品的50mmol/l PBS緩沖液，pH7.4。

洗滌液由在濃度為20mol/L、pH 為7.4的磷酸鹽緩沖液中加入1％的Tween-20 配制而成；

所述化學發光底物溶液分為發光底物A溶液和發光底物B溶液；發光底物A為0.1M、 pH值為8.5的Tris-HCl緩沖液，且該緩沖液中含有終濃度為 5.0mg/mL的魯米諾，所述發光底物B為是pH值為4.5的0.1M檸檬酸緩沖液，且該緩沖液中含有終濃度為100 mg/mL的過氧化氫和15mg/mL辣根過氧化氫酶。

2.一種權利要求1所述的定量測定試劑盒的制備方法，具體步驟如下：

1）Cyfra21-1磁分離試劑的制備：采用化學交聯法將Cyfra21-1單克隆抗體和磁性微球偶聯，磁性微球直徑在1.0μm左右，制備后用PBS緩沖液沖洗三次，然后用1%的BSA溶液封閉3小時，磁性分離微球，用PBS緩沖液沖洗三次，然后用50mmol/L的PBS緩沖液重新懸浮，加入終濃度0.4mg/ml的十八烷基三甲基氯化銨，0.2mg/ml的卵磷脂和0.1mg/ml的PEG200，調pH值至7.4即得；

2）酶標記的Cyfra21-1抗體溶液的制備：采用NaIO₄法標記Cyfra21-1單克隆抗體，反應后透析純化，然后用20mmol/L的PBS緩沖液溶解，加入終濃度1mg/ml BSA，調pH值至7.4即得；

3）常規方法配置標準品、洗滌液和化學底物溶液。