[發(fā)明專利]一種檢測(cè)哺乳動(dòng)物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610858045.1
• 申請(qǐng)日: 2016-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106636329B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈力;董海燕;王杰;韓龍宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6804
• 分類號(hào): C12Q1/6804;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12R1/91
• 代理公司: 35100 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種檢測(cè)哺乳動(dòng)物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的試劑盒，其特征在于：執(zhí)行該試劑盒的方法，包括以下步驟：

（1）微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)蛋白高特異性結(jié)合適配體AP的設(shè)計(jì)與合成；

（2）適配體AP成環(huán)反應(yīng)得到^CAP；

（3）DNA納米器件PDN的制備；

（4）微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞所在的單核細(xì)胞層的分離；

（5）DNA納米器件PDN標(biāo)記單核細(xì)胞層中的目標(biāo)微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞；

（6）免疫磁珠法分離DNA納米器件PDN標(biāo)記的微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞；

（7）滾環(huán)擴(kuò)增法測(cè)定微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞細(xì)胞數(shù)；

步驟（1）的適配體AP是基于Cell-SELEX技術(shù)，以微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)蛋白為模板而設(shè)計(jì)合成的；

步驟（3）DNA納米器件PDN的制備方法是：依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，設(shè)計(jì)能與AP連接成多環(huán)的引物DNA1、DNA2，其中，DNA1和DNA2有兩段相同的序列片段①和②；環(huán)化DNA1和DNA2得到^CDNA1和^CDNA2，將^CAP、^CDNA1、^CDNA2以1:1:1-1:5:5的摩爾比混和，雜交得DNA納米器件PDN；

步驟（7）滾環(huán)擴(kuò)增所用的引物RCAprimer是依據(jù)DNA1和DNA2的相同序列片段①設(shè)計(jì)的；滾環(huán)擴(kuò)增所用的分子信標(biāo)MB是依據(jù)DNA1和DNA2的相同序列片段②設(shè)計(jì)的。