[發明專利]基于組織培養的花葉吳風草快速繁育方法

在審

• 申請號: 201610854285.4
• 申請日: 2016-09-27
• 公開（公告）號: CN107864854A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 陳建華;黃建榮;金夢怡;李霖;龐玉華
• 申請（專利權）人: 上海上房園藝有限公司;上海上房園林植物研究所有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上?？剖⒅R產權代理有限公司31225
• 代理人: 褚明偉

技術領域

本發明涉及一種植物繁育方法，尤其是涉及一種基于組織培養的花葉吳風草快速繁育方法。

背景技術

花葉大吳風草為菊科大吳風草屬植物，多年生常綠草本，基生葉蓮座狀，腎形，葉綠黃嵌合。10-11月開花，黃色?；ㄈ~大吳風草栽培容易，且常綠，綠葉成叢極為美觀。園林中多叢植或于花境、路旁栽植、樹林下。花葉大吳風草耐半蔭，又可做疏林地被植物，是良好的花鏡與庭院材料。做為國外引進的品種引種數量較少，其分株慢，市場需求量大，種苗供應受限制。

中國專利CN103734019A公布了一種新西蘭麻的組織培養方法，該方法包配制不同階段的培養基來進行組織培養，可以提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀等優點。但是由于新西蘭麻與花葉吳風草習性以及所需繁育環境差別較大，上述組織培養方法不能直接用于花葉吳風草的繁育過程。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種繁育速度快、成活率高的基于組織培養的花葉吳風草快速繁育方法。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種基于組織培養的花葉吳風草快速繁育方法，包括以下步驟：

(1)培養基的配制，包括組培各階段培養基的組分和含量：

1.1、芽誘導培養基：MS+BA 1-3mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L；

1.2、不定芽增殖培養基：MS+6-BA 0.5-1.5mg/L+NAA 0.05-0.15mg/L；

1.3、壯苗培養基：MS+6-BA 0.1-0.3mg/L+NAA 0.01-0.03mg/L；

1.4、生根培養基：MS+NAA 0.05-0.15mg/L；

上述各種培養基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，培養溫度為25±1℃，光照為1100-1300Lx；

(2)花葉吳風草的組織培養：

2.1、無菌材料的獲得

花葉吳風草在春季3-4月挖取地上部分的小芽，用自來水沖洗1h后于超凈工作臺上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，無菌水沖洗5-6次，無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成1cm長，接種于芽誘導培養基上；

2.2、芽的分化和增殖

小芽接種于誘導培養基上30天后，小芽基部開始膨大，出現黃綠色突起,再培養25天可見明顯的愈傷組織，繼續培養30天，切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養基上培養；

2.3、不定芽壯苗培養

在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽每叢只有3-4株可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養基，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm；

2.4、生根培養

取1.5-2cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，20天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至1-2cm；

2.5、煉苗與移栽

生根培養28-32天后，根系長至1-2cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化煉苗40天后，即移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90％以上。

作為優選，所述的芽誘導培養基的組分和含量為：MS+BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L，該培養基下小芽長勢最好。

作為優選，所述的不定芽增殖培養基的組分和含量為：MS+6-BA1mg/L+NAA 0.1mg/L，該培養基下，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速，無黃花或變全綠等不良現象，在該培養中生長發育良好。

作為優選，所述的壯苗培養基的組分和含量為：MS+6-BA 0.2mg/L+NAA0.02mg/L。

作為優選，所述的生根培養基的組分和含量為：MS+NAA0.1mg/L，該培養基下，根系粗壯，須根眾多，生根率為100％。

由于不同植株對于培養條件要求不同，尤其是對于培養基的要求差別很大，其中一個環節的培養基主要成分或含量的改變就有可能導致繁育成功率的大大降低。因此，本發明通過長久的實驗過程，并根據花葉吳風草的特有植物生長屬性與生長需求，研究了適合花葉吳風草快速繁育的多種培養基，在使用這些特殊研制的培養基基礎上，結合本發明的培養條件，成功培育了花葉吳風草。