[發(fā)明專利]一種用于提取柑橘果肉有色體中的質(zhì)體小球的方法

有效

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• 申請日: 2016-09-20
• 公開（公告）號: CN106399222B
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發(fā)明（設計）人: 鄧秀新;劉云;曾云流;謝宗周
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 陳薇

本發(fā)明涉及一種用于提取柑橘果肉有色體中的質(zhì)體小球的方法，其包括以下步驟：S1：從柑橘果肉中提取有色體；S2：超聲破碎所述有色體，得到有色體裂解液；S3：使用含有碘海醇濃度梯度的系列溶液對所述有色體裂解液于150000g下梯度離心，分層后的上層液體即為質(zhì)體小球。通過使用本發(fā)明的方法可有效地從柑橘果肉中提取有色體質(zhì)體小球，分層效果明顯，所得到的質(zhì)體小球的純度高，提純效果好，并且保持了質(zhì)體小球中的蛋白質(zhì)在種類和結(jié)構(gòu)上的完整性。

技術領域

本發(fā)明涉及植物生化領域，更特別地，涉及一種用于提取柑橘果肉有色體中的質(zhì)體小球的方法。

背景技術

質(zhì)體是植物中特有的細胞器，包括葉綠體、白色體和有色體。質(zhì)體小球是廣泛存在于質(zhì)體中的脂蛋白顆粒(如圖4的柑橘果肉電鏡照片，黑色區(qū)域為質(zhì)體小球)。在葉綠體中，質(zhì)體小球在結(jié)構(gòu)上與類囊體外膜相連，類囊體以起泡的形式產(chǎn)生質(zhì)體小球。質(zhì)體小球作為類囊體上的微域，在參與類囊體合成、修復、降解以及新陳代謝上具有重要作用。在柑橘果肉有色體(質(zhì)體的一種形式)中也存在大量質(zhì)體小球，然而它的功能并不清楚。質(zhì)體小球的主要由單層膜、由該膜包裹的脂類物質(zhì)和鑲嵌在該膜上的約30種蛋白質(zhì)組成，其中脂類物質(zhì)包括質(zhì)體醌、葉綠素醌、生育酚、三酰甘油、類胡蘿卜素等。鑲嵌于膜上的蛋白質(zhì)可分成三大類：(1)豐度最高的原纖維蛋白(FBNs)；(2)參與脂類代謝物的酶，例如，ABC1K激酶以及部分參與類胡蘿卜素和維生素E代謝的酶類；(3)其他蛋白質(zhì)。

質(zhì)體小球的膜上鑲嵌的蛋白質(zhì)與其功能有關，改變質(zhì)體小球上蛋白質(zhì)會引起代謝物的變化。擬南芥中關于葉綠體質(zhì)體小球的蛋白組成及部分結(jié)構(gòu)基因的功能已得到了初步驗證，但是對于非綠色組織中的質(zhì)體小球的起源、發(fā)育、蛋白質(zhì)組成及調(diào)控機制并不清楚。為了研究質(zhì)體小球在柑橘果肉等非綠色組織中的功能，首先需要分離得到質(zhì)體小球。中國專利201010260376.8公開了一種提純柑橘果肉有色體的方法，然而尚沒有專門針對柑橘果肉有色體的質(zhì)體小球的提取方法。

超速密度梯度離心是最常用的質(zhì)體小球提純方法。理想的梯液要具備優(yōu)良的化學穩(wěn)定性、高溶合度、低滲透性、好的溶劑中穩(wěn)定性以及較低的光吸收性等特性這種材料最好還是廉價的。例如，蔗糖就是一種比較合適的梯度材料。盡管它在高密度(>30％W/N)時粘性系數(shù)較大，但綜合比較表明它可以廣泛應用。但由于蔗糖在各種密度下都具有有較高的滲透性(即使是低密度時也如此)，因此，分離一些滲透性敏感的生物組分時，需要選擇其他梯度材料，如由pharmacia公司開發(fā)的Ficoll等等。對細胞、亞細胞結(jié)構(gòu)或其他生物大分子的等密度離心分離也各有不同要求。常用于等密度離心梯度材料見表1所示：

表1等密度離心梯度的應用