[發(fā)明專利]一種用于提取柑橘果肉有色體中的質(zhì)體小球的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610845699.0 | 申請(qǐng)日： | 2016-09-20 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN106399222B | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-07-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 鄧秀新;劉云;曾云流;謝宗周 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N5/04 | 分類號(hào)： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212 | 代理人： | 陳薇 |
| 地址： | 430070 *** | 國(guó)省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 小球 質(zhì)體 柑橘果肉 裂解液 分層 超聲破碎 濃度梯度 上層液體 梯度離心 提純效果 碘海醇 有效地 蛋白質(zhì) 體質(zhì) | ||
1.一種用于提取柑橘果肉有色體中的質(zhì)體小球的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：從1600克柑橘果肉中提取有色體，并將所述有色體于6000g下離心7min得到沉淀；
S2：超聲破碎所述有色體，得到有色體裂解液，包括以下步驟：
S2.1：用4ml緩沖液B重懸所述沉淀，并向其中添加100μl蛋白酶抑制劑和100μl磷酸酶抑制劑，得到有色體混合液；
S2.2：將所述有色體混合液用液氮速凍，并于-80℃下放置1.5h，然后在冰上融化；
S2.3：凍融處理的所述有色體混合液在冰浴狀態(tài)下，用超聲破碎儀破碎，得到有色體裂解液；
S3：使用含有碘海醇濃度梯度的系列溶液對(duì)所述有色體裂解液于150000g下梯度離心，分層后的上層液體即為質(zhì)體小球，包括以下步驟：
S3.1：取13.2ml離心管，用無(wú)菌的牛血清均勻涂抹于所述離心管內(nèi)壁上；
S3.2：用緩沖液A稀釋緩沖液B，得到碘海醇含量分別為質(zhì)量體積比20％、10％、7.5％和5％的碘海醇溶液，向所述離心管中依次加入4ml所述有色體裂解液、2ml20％的碘海醇溶液、1ml10％的碘海醇溶液、2ml7.5％的碘海醇溶液和3ml5％的碘海醇溶液；
S3.3：將加有所述有色體裂解液和碘海醇密度梯度溶液的離心管于4℃150000g下離心15h，液體分層后，最上層液體即為質(zhì)體小球；
其中，所述緩沖液A的配方如下：
所述緩沖液B的配方如下：
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