[發明專利]一種快速高效同時檢測土壤、污泥中11種抗生素含量的方法

有效

• 申請號: 201610829914.8
• 申請日: 2016-09-19
• 公開（公告）號: CN106468691B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 南瓊;唐景春;彭中亞;黃華;黃耀
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72
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本發明提供了一種同時檢測土壤中11種抗生素的方法，采用UPLC?MS/MS方法檢測抗生素，以加標法確定檢測方法的回收率。本方法主要采用SAX與HLB小柱串聯的形式對提取的抗生素進行萃取純化，使用UPLC/MS/MS檢測。本發明所述方法是一種回收率高，重復性好，能夠快速批量同時檢測土壤中抗生素的新型方法，步驟簡便，快速，所檢測抗生素10分鐘內全部分離開，檢測限低，適于低含量的抗生素檢測，為檢測環境中抗生素污染，監測抗生素含量，研究抗生素降解轉化機理，提供了便捷條件。

技術領域

本發明屬于環境污染物的檢測技術領域，具體涉及一種快速高效檢測土壤、污泥中氯霉素、氟苯尼考、呋喃唑酮、恩諾沙星、氧氟沙星、土霉素、紅霉素、磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、氨芐青霉素和四環素11種類抗生素的方法。

背景技術

由于抗生素具有很好的抗菌作用，被廣泛的用于人和動物的疾病治療，尤其在畜牧業與水產養殖業的使用量非常大，這使得在國內外的環境基質和食品中均檢測到了不同濃度的抗生素。環境中抗生素含量不僅嚴重擾動了土壤微生物基因庫，影響生態系統安全，還能通過食物鏈的傳遞富集進入到高級動物體內，危害人和動物的健康。

建立快速、準確、同時測定土壤和污泥等固相基質中多種抗生素是研究和控制抗生素生態風險的基礎。截止目前，抗生素的檢測方法主要包括微生物檢測法，免疫分析法，理化檢測法三大類。其中，理化檢測法檢出限最低，是目前應用最廣泛的抗生素檢測方法。然而，土壤和污泥中抗生素及代謝產物種類繁多且濃度低，而土壤和污泥本身的各種有機或無機雜質都會干擾抗生素的檢測。因此，如何有效除雜、快速定性定量成為檢測抗生素的重點。

UPLC/MS/MS檢測技術通過測質荷比豐度從而得到離子流色譜圖，專屬性較強，所以干擾較少，定性準確。液質聯用靈敏度高，檢測限低且分析時間短，適于檢測痕量抗生素，能夠快速高效同時檢測多種抗生素，在土壤和污泥中抗生素檢測方面具有廣泛的應用前景。

發明內容

本發明的目在于提供一種能夠同時地檢測土壤中多種抗生素的方法，能夠快速高效的檢測土壤中多種類抗生素，其檢測限低，靈敏度高且檢測速度快。

技術方案

(1)土壤、污泥樣品的采集、保存與前期處理

采集0～20cm表層土壤在-20℃條件下避光保存。對于底泥，采集保存時注意趕出空氣，使用冷凍干燥機冷干，研磨過40目篩子，-20℃冷藏。

(2)配制土壤、污泥抗生素提取液

稱取含有兩個結晶水的磷酸二氫鈉3.12g，加入200μL濃磷酸，用超純水定容至100ml，得到pH＝3的磷酸緩沖溶液。將色譜級乙腈與磷酸緩沖溶液按照體積比7：3混合，得到土壤提取液。

(3)提取土壤、污泥中抗生素

稱取土壤或污泥樣品1g(精確到0.0001g)于50ml離心管中，依次加入0.2gNa₂EDTA和10mL土壤、污泥抗生素提取液(見(1))。渦旋1分鐘，超聲10分鐘，離心(8000轉)15分鐘，收集上清液。此過程共重復3次。將得到的上清液合并后，用超純水稀釋至400ml。使用0.45μm有機相微孔濾膜抽濾。

(4)固相萃取富集并濃縮抗生素

使用SAX和HLB小柱進行固相萃取：將SAX柱和HLB柱通過SPE連接柱小件連接起來置于固相萃取真空裝置上。依次使用6ml色譜級甲醇和6mL超純水對小柱進行活化和沖洗。隨后，使用大容量采樣管將抗生素提取液(見(2))與固相萃取柱連接，打開真空泵進行固相萃取。結束后，用超純水清洗固相萃取小柱，真空干燥30分鐘。棄去SAX小柱。使用2×5mL色譜級甲醇將抗生素從HLB小柱中洗脫于15mL試管中，50℃水浴條件下高純氮氣吹至近干。添加1mL色譜級甲醇再次溶解抗生素后，使用0.22μm針式濾膜轉移至2mL進樣小瓶中，上機測定。