[發(fā)明專利]開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑及其合成方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610828240.X
• 申請日: 2016-09-18
• 公開（公告）號: CN106632266A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尤進(jìn)茂;呂政賢;路帥敏;竇昆;孫志偉;李國梁
• 申請（專利權(quán)）人: 曲阜師范大學(xué)
• 主分類號: C07D403/04
• 分類號: C07D403/04;G01N21/64
• 代理公司: 青島發(fā)思特專利商標(biāo)代理有限公司37212
• 代理人: 王燕

1.一種開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑，其特征在于：以咔唑?yàn)闊晒饣鶊F(tuán)，馬來酰亞胺為反應(yīng)活性基團(tuán)，其化學(xué)名稱是：N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰亞胺，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式是：

2.一種權(quán)利要求1所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將順丁烯二酸酐溶解到乙腈中，常溫下滴加含有3-氨基-9-乙基-咔唑的乙腈溶液進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢，除去溶劑，得到中間體N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰胺酸；

(2)用乙酸酐將N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰胺酸溶解，加入無水乙酸鈉進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完畢冷卻，再倒入水中淬滅反應(yīng)，回收固體后，經(jīng)干燥、重結(jié)晶得到目標(biāo)產(chǎn)物N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰亞胺。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于：步驟(1)中順丁烯二酸酐和3-氨基-9-乙基-咔唑的摩爾比為1.1～1.4:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于：步驟(1)中滴加完畢后，繼續(xù)反應(yīng)0.8～1小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于：步驟(1)中反應(yīng)完畢后，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于：步驟(2)中無水乙酸鈉與N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰胺酸的摩爾比為1:5～8。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于：步驟(2)中加入無水乙酸鈉后，在100℃下反應(yīng)0.8～1小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的合成方法，其特征在于：步驟(2)中采用乙腈重結(jié)晶三次。

9.一種權(quán)利要求1所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的應(yīng)用，其特征在于：用于檢測樣品中硫醇的濃度。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑的應(yīng)用，其特征在于包括以下步驟：

(1)配制pH＝7.4、濃度為10mM的PBS緩沖溶液；配制5份硫醇標(biāo)準(zhǔn)品的乙腈溶液，濃度分別為1μM、10μM、100μM、1mM、10mM；配制濃度為100mM的N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰亞胺的乙腈溶液；

(2)依次將50μL PBS緩沖溶液、100μL硫醇標(biāo)準(zhǔn)品的乙腈溶液和50μL N-(9-乙基-咔唑)-馬來酰亞胺的乙腈溶液加到2mL的安剖瓶中，于40℃的水浴中反應(yīng)10分鐘，反應(yīng)完畢后，取10μL進(jìn)入高效液相色譜儀中分析，設(shè)置熒光激發(fā)波長為274nm，熒光發(fā)射波長為363nm，得到硫醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖，以硫醇濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制硫醇濃度工作曲線；

(3)將樣品用開關(guān)型硫醇熒光標(biāo)記試劑標(biāo)記后，進(jìn)入高效液相色譜儀中分析，將所得到的峰面積代入硫醇濃度工作曲線中，即可求得樣品中硫醇的濃度。