[發(fā)明專利]一種高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610815086.2
• 申請日: 2016-09-12
• 公開（公告）號: CN106387304B
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳繼承;趙曉丹;池承燈;陳藝暉;陳莉
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: A23J7/00
• 分類號: A23J7/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）原料預(yù)處理：將清洗干凈的鮑魚內(nèi)臟按固液重量比1：5~1：10加入蒸餾水，并用高速組織搗碎機，轉(zhuǎn)速10000r/min將其打漿；

2）高壓脈沖電場與酶解偶聯(lián)：絞成漿后的鮑魚內(nèi)臟置于配料缸，進行15~20 min的高壓脈沖電場處理；用0.2 M PBS緩沖溶液調(diào)pH至5.5~8.0，加入復(fù)合蛋白酶，40~55 ℃酶解1~3h，90 ℃滅酶10~20 min；4000 rpm離心10~20 min除去不溶物，收集鮑魚內(nèi)臟提取物的上清液A；

3）脂質(zhì)提取：用正己烷浸提2）中上清液A，萃取得到鮑魚總脂和水溶液B；總脂用3~6倍體積丙酮洗滌，得到丙酮不溶物用甲醇溶解，-20 ℃?zhèn)溆茫?/p>

4）磷脂分離：將3）提取到的丙酮不溶物的甲醇溶液裝入硅膠層析柱，分別用8~12倍體積的甲醇、氯仿和丙酮沖洗，收集洗脫液，進行旋蒸；

5）蛋白分離：調(diào)節(jié)步驟3）收集到的水溶液B的pH至5.0~5.5，4000 rpm離心10-20 min沉淀蛋白，冷凍干燥，備用；收集上清液C；

6）鮑魚多糖提取：將步驟5）獲得的上清液C濃縮后加入95wt%乙醇，4 ℃下沉淀10~12h，4000 rpm離心10~20 min獲得多糖沉淀；將多糖重新溶解于蒸餾水，95wt%乙醇反復(fù)醇沉3-5次，收集沉淀物，冷凍干燥得到鮑魚多糖；

在步驟2）中的高壓脈沖電場處理條件為：電場強度20~40 KV/cm，脈沖時間350~450 μS，脈沖頻率200-400 Hz。

2.一種如權(quán)利要求1所述高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法，其特征在于：在步驟2）中離心除去的不溶物經(jīng)60~70℃的熱風(fēng)干燥，用作動物飼料。

3.一種如權(quán)利要求1所述高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法，其特征在于：在步驟2）中的復(fù)合蛋白酶為：AS.1398中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的三種組合，總添加量為原料重量的0.1~1%。