[發明專利]一株產二甲苯單加氧酶的菌株Arthrobacterwoluwensis及其應用

有效

• 申請號: 201610814722.X
• 申請日: 2016-09-12
• 公開（公告）號: CN106434434B
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 李廣生;楊濤;萬剛強;曲欣欣
• 申請（專利權）人: 迪沙藥業集團有限公司;威海迪素制藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/12;C12R1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株產二甲苯單加氧酶的菌株Arthrobacter woluwensis HW-1，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為CGMCC 12833。

2.權利要求1所述Arthrobacter woluwensis HW-1菌株在制備5-甲基吡嗪-2-羧酸中的應用。

3.應用權利要求1所述Arthrobacter woluwensis HW-1菌株制備5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法，其特征在于，以2,5-二甲基吡嗪為原料，以含有二甲苯單加氧酶活性的HW-1菌株作為催化劑，于pH 5.0~8.0，20~40℃下進行發酵轉化，通過批次補料的方式進行反應提高產物積累量，最終獲得所述較高濃度的產物5-甲基吡嗪-2-羧酸。

4.權利要求3所述制備5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法，其特征在于，

第一步菌體種子液的制備

將Arthrobacter woluwensis接種到種子培養基中，在搖床轉速100~180 r·min^-1、20~40℃下培養12~24 h，獲得種子液，其中，所述種子培養基成分為蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，NaCl 10g/L，溶劑為水；

第二步菌株發酵及生物轉化

（1）將Arthrobacter woluwensis種子液以1~5%的接種量接到發酵培養基中，在二甲苯的誘導下，搖床轉速100~180 r·min^-1、pH 6.0~8.0，20~40℃培養；

所述培養基組成為：酵母粉0.5~2.0 g/L；蛋白胨1.0~4.0 g/L；硫酸銨 1.0~3.0 g/L；碳酸氫鈉 1.0~5.0 g/L；磷酸二氫鉀 0.5~4.0 g/L；氯化鈉1.0~5.0 g/L；氯化鎂 0.1~0.5 g/L；氯化鈣 1.0~5.0 g/L；氯化鐵 0.05~0.3 g/L；硫酸鋅0.02~0.1 g/L；氯化錳 0.05~0.1 g/L；氯化銅 0.05~0.02 g/L；氯化鎳0.01~0.03 g/L；EDTA·Na₂·2H₂O 1.0~5.0 g/L；硫酸亞鐵1.0~3.0 g/L，二甲苯 0.1~2 mL/L，溶劑為水；

（2）向發酵液中加入底物2,5-二甲基吡嗪，初始濃度為0.5~2 mL/L，繼續發酵培養。

5.權利要求3所述制備5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法，其特征在于，在發酵轉化過程中的pH維持在6.0~7.0之間。

6.權利要求3所述制備5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法，其特征在于，轉化率超過50%時適時進行補加底物2,5-二甲基吡嗪。