[發明專利]一種薄層色譜耦合氣相色譜質譜聯用技術分析煙草污染物的方法

有效

• 申請號: 201610813611.7
• 申請日: 2016-09-09
• 公開（公告）號: CN106442845B
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 張洪非;姜興益;羅彥波;李翔宇;朱風鵬;李雪;龐永強
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/02
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

本發明屬于煙草及煙草制品的污染化合物的篩查分析技術領域，具體涉及一種薄層色譜耦合氣相色譜質譜聯用技術分析煙草污染物的方法。

背景技術

煙葉在生產、運輸以及存放的過程中會受到外源物質的污染，從而影響煙葉的香氣和吃味。但是受到污染的煙葉究竟是被哪種物質污染，以及污染源來自何處等問題，在實際工作中較難解決。

發明內容

本發明的目的是提供一種薄層色譜耦合氣相色譜質譜聯用技術分析煙草污染物的方法，其具有工序簡單、檢測時間短的特點，可有效提高煙草污染物的篩查效率。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：

一種薄層色譜耦合氣相色譜質譜聯用技術分析煙草污染物的方法，包括以下步驟：

1)向煙末樣品中加入萃取劑進行萃取，過濾，得到上清液；

2)取上清液進行薄層層析，在薄層板上得到互相分離的組分斑點；

3)取下組分斑點并加入溶劑進行洗脫溶出，得到溶出液；

4)將溶出液進行氣相色譜質譜聯用分析，得到樣品譜圖；將樣品譜圖與標準煙樣的譜圖進行比較，確定差異色譜峰；依據差異色譜峰的譜峰信息確定污染物。

薄層色譜(TLC)又叫薄板層析，其是將吸附劑、載體或其他活性物質均勻涂鋪在平面板上，形成薄層后，在此薄層上進行層析分離的分析方法。薄層層析的主要操作步驟包括：薄層板的制備、樣品的滴加、展開、顯色、比較Rf值及定量分析等。由于樣品中各組分的性質不同，經移動展開后，可得相互分離的組分斑點。

氣相色譜質譜聯用技術即將氣相色譜儀與質譜儀通過接口組件進行連接，以氣相色譜作為試樣分離、制備的手段，將質譜作為氣相色譜的在線檢測手段進行定性、定量分析，輔以相應的數據收集與控制系統構建而成的一種色譜-質譜聯用技術。

本發明是利用結合薄層色譜和氣相色譜質譜聯用技術，建立煙葉中外源性物質的篩查方法，為找出煙葉的污染源提供了一種新途徑。該方法利用煙樣中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能不同，或和其他物質親和作用性能的差異，實現不同溶質快速分離；再利用氣相色譜質譜聯用儀進行痕量試樣的研究；薄層色譜和氣相色譜質譜聯用技術的結合對于煙樣中污染物的篩查具有極強的適用性，可以更好的促進傅里葉變換紅外分析儀-氣相色譜質譜聯用儀技術在煙葉污染物篩查領域的應用。該方法充分利用兩種技術的優勢，具有操作簡單、檢測時間短的特點，可有效提高煙草污染物的篩查效率。

步驟1)中，所述萃取劑為環己烷、甲苯、丙酮、水中的任意一種或多種。進一步優選的，所述萃取劑為甲苯和/或丙酮。每20mL～30mL萃取劑中，煙末樣品的加入量為1.0g；萃取時，在150rpm下振蕩30min，靜置，過濾，即得上清液。

步驟2)中，薄層層析時，所用展開劑為丙酮、甲醇、環己烷、乙酸乙酯中的任意一種或多種。進一步優選的，所述展開劑為甲醇和/或丙酮。

薄層層析時，所用薄層板可自制或采用市場常規產品。為縮減試驗時間，減少工作量，提高試驗準確性，可直接選用市售經過活化的熒光薄層板。

點樣時，樣品的滴加宜在密閉的容器中進行，避免因空氣中水分而降低活化板的吸附性。若在空氣中滴加，一般不超過10min。樣品滴加的方法與紙上層析相似：樣品量為5～10μg，滴加后的原點擴散直徑不超過0.5cm，樣點間距離不低于1.5cm，點樣起點距薄層板底部邊緣至少1.5cm。

薄層層析時，薄層板浸入展開劑的深度不超過0.5cm。展開時，可在展開容器內粘附展開劑浸過的濾紙條以加速蒸汽的飽和，實現對展開容器的預飽和。薄層板的展開距離為10～14cm，展開時間為30～60min，溶劑達到預先用鉛筆劃好的前沿后，取出板，在100℃加熱20～30分鐘或者常溫干燥，然后用254nm紫外燈照射，觀察現象。可采用一次上行法、雙向上行法或遞次上行法進行展開。薄層層析裝置可采用現有技術，或采用申請號為CN201620567847.2的專利公開的薄層層析裝置。

步驟3)中，所述溶劑為丙酮。

步驟4)中，氣相色譜質譜聯用分析的分析條件為：色譜柱：HP-5MS(60m*250μm*0.25μm)毛細管柱；進樣口溫度：280℃；載氣：He，1ml/min；傳輸線溫度：270℃；EI源電子能量：70eV；倍增器電壓：1450V；質量掃描范圍：30～550amu；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；進樣量：1μL；分流比：1:10；程序升溫：起始溫度：50℃，保持2min，然后以5℃/min升溫到250℃，保持6min；溶劑延遲時間為6min。