[發明專利]麥盧卡蜂蜜的快速鑒別檢測方法

在審

• 申請號: 201610806572.8
• 申請日: 2016-09-06
• 公開（公告）號: CN107449836A
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 吳斌;張睿;丁濤;鄧曉軍;張峰;劉蕓;費曉慶;張曉燕;柳菡;沈偉健;陳磊;郭德華;伊雄海;何宇平
• 申請（專利權）人: 江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心;上海出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢驗檢疫中心;中國檢驗檢疫科學研究院食品安全所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司32206
• 代理人: 張慧清

技術領域

本發明屬于食品檢測領域，特別是涉及一種麥盧卡蜂蜜的快速鑒別檢測方法。

背景技術

麥盧卡蜂蜜是新西蘭特有的一種珍貴蜜種，是蜜蜂采集新西蘭特有的一種灌木—Manuka(Leptospermum scoparium)的花蜜釀造而成的。它區別于其他蜂蜜之處在于麥盧卡蜂蜜有強大而獨特的抗菌活性。蜂蜜一般都具有抗菌活性,這是由蜂蜜本身的高滲透性、較強的酸度并且一般含有過氧化物造成的。而麥盧卡蜂蜜的抗菌活性則不依賴于過氧化物，因此被稱為非過氧化抗菌活性(non-peroxide antibacterial activity,NPA)。目前，新西蘭的麥盧卡蜂蜜出口近10年來每年增長10％左右，2013年，從新西蘭出口的蜂蜜價值1.28億新西蘭元。但是根據新西蘭一家蜂農協會的統計，新西蘭每年大約只出產1700～2000噸的麥盧卡蜂蜜，而在全球范圍內，每年以麥盧卡名義出售的蜂蜜高達1萬噸以上。麥盧卡蜂蜜大量造假的背后必然存在高額的商業利潤。同樣是500g包裝的蜂蜜，麥盧卡蜂蜜的售價通常是國產蜂蜜的10倍以上，與其他進口蜂蜜相比一般也要高出50％。而且，活性等級越高，售價越高。這就導致用糖漿或者其他蜂蜜冒充麥盧卡蜂蜜，以及虛假標示麥盧卡蜂蜜活性等級的現象屢見不鮮。

2014年7月底，新西蘭初級產業部(MPI)頒布了一份《臨時性麥盧卡蜂蜜標簽指導方針》(Interim Labeling Guide for Manuka Honey)，對麥盧卡蜂蜜的產品標簽進行了規范，并且對麥盧卡蜂蜜的鑒別給出了臨時性的標準。標準規定，只有滿足色澤≥62mm pfund，導電率：347-867μS/cm，滋味：礦物風味、微苦，氣味：濕土味、類似石楠植物的氣味、氣味芳香，有麥盧卡植物的花粉及能檢出二羥基丙酮(DHA)和甲基乙二醛(MGO)指標的蜂蜜，其產品標簽上才能標注“Manuka”字樣，然而，這些指標并不能從根本上排除以次充好、摻假使假的問題。

發明內容

本發明的目的是找到一種簡單、快速且具有高靈敏度的麥盧卡蜂蜜的鑒別檢測方法。

為了實現麥盧卡蜂蜜的鑒別，本發明采用高效液相色譜-四極桿靜電場軌道徑-高分辨質譜，通過差異化分析法比較純天然麥盧卡和其它不同蜜源植物的蜂蜜，找出質量數為582.2154，分子結構式為(C₂₄H₃₈O₁₆)的麥盧卡蜂蜜內源性特征標志物。并根據高分辨質譜母離子精確質量數和子離子特征碎片,從而可以定性和定量確認蜂蜜中是否含有麥盧卡蜂蜜特征標志物及其含量。

如果滿足以下兩個條件則說明待檢測的樣品為麥盧卡蜂蜜，如果不滿足以下任意一個條件，則說明待檢測的樣品不為麥盧卡蜂蜜，這兩個條件分別為：

1、待檢測樣品中含有3，5-二甲氧基苯甲酸甲酯-4-雙葡萄糖糖苷；

2、待檢測樣品中3，5-二甲氧基苯甲酸甲酯-4-雙葡萄糖糖苷的含量大于等于100mg/kg。

檢測共分三步進行，包括樣品前處理，液相色譜分離和質譜檢測。

具體來說，樣品前處理是先將蜂蜜溶解于水中，靜置，取上層溶液過濾膜，作為進樣樣品。

所述的過濾膜為水相濾膜(0.45um)。

其更為具體的操作方式是首先準確稱取溶化后的樣品1.00g(精確到0.01g)于適當的刻度容器中，然后用水定容至10.0mL，渦旋震蕩至溶解，取適量上層清液過濾膜，得到用于分析的進樣樣品。

得到進樣樣品后，我們對進一步進行液相色譜分離和質譜檢測，從而獲得相應地液相色譜圖和質譜圖。

同時，在本發明中我們進一步分別公開了較為優選地高效液相色譜分離條件和質譜檢測條件，具體如下：

(1)高效液相色譜分離條件如下，

色譜柱：Dikma Diamonsil Plus C₁₈150*4.6mm色譜柱；

流動相：A為0.1％(v/v)甲酸水溶液，B為乙腈；

流速：0.8mL/min；

梯度洗脫程序：0-2min 70％A,2-12min 70-10％A,12-15min 10％A,15-16min10-90％A，16-18min 70％A；

柱溫：25℃；

進樣體積：25μL。

(2)質譜檢測選用可加熱的電噴霧離子源為檢測離子源，采用負離子掃描模式，檢測條件為，

毛細管溫度350℃；

鞘氣(N₂)流速50L/min；