[發明專利]一種豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201610806538.0
• 申請日: 2016-09-07
• 公開（公告）號: CN106399350B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 呂紅;周峻崗;段進坤;余垚
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N1/19;C12N7/04;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種重組載體，其特征在于，通過將編碼豬圓環病毒II型Cap蛋白的核苷酸插入到馬克斯克魯維酵母表達載體所構建；

所述重組載體包括馬克斯克魯維酵母自主復制序列、馬克斯克魯維酵母菊粉酶啟動子序列、編碼豬圓環病毒II型Cap蛋白的基因序列、馬克斯克魯維酵母菊粉酶終止子序列、大腸桿菌復制序列和抗性篩選基因、和營養缺陷篩選基因,所述馬克斯克魯維酵母表達載體的DNA序列為SEQ ID No.5。

2.根據權利要求1所述的重組載體，其特征在于，由馬克斯克魯維酵母組成型菊粉酶啟動子和終止子控制豬圓環病毒II型Cap蛋白的轉錄翻譯。

3.根據權利要求1所述的重組載體，其特征在于，編碼所述豬圓環病毒II型Cap蛋白的核苷酸系列為SEQ ID No.2所示序列。

4.一種馬克斯克魯維酵母重組工程菌株，其特征在于，由權利要求1所述重組載體轉化馬克斯克魯維酵母營養缺陷型菌株所構建。

5.根據權利要求4所述的馬克斯克魯維酵母重組工程菌株，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母的營養缺陷型菌株，為馬克斯克魯維酵母菌敲除部分或全部特定營養基因所得。

6.根據權利要求5所述的馬克斯克魯維酵母重組工程菌株，其特征在于，所述特定營養基因為URA3基因。

7.根據權利要求5所述的馬克斯克魯維酵母重組工程菌株，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母菌為CGMCC No.10621。

8.一種制備豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗的方法，其特征在于，包括：

將編碼豬圓環病毒II型Cap蛋白的核苷酸插入到馬克斯克魯維酵母表達載體，構建權利要求1所述重組載體；

將重組載體轉化馬克斯克魯維酵母營養缺陷型菌株，構建重組酵母；

重組酵母培養發酵，進行Cap蛋白的表達；

利用Cap蛋白在酵母細胞內自組裝成豬圓環病毒II型病毒樣顆粒；

收集培養發酵的菌，分離純化獲得豬圓環病毒II型病毒樣顆粒；

以所述豬圓環病毒II型病毒樣顆粒為活性成分或活性成分之一，制備豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述分離純化包括：所收集的培養發酵的菌，破裂后收集釋放的病毒樣顆粒，凝膠層析純化豬圓環病毒II型病毒樣顆粒。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述重組酵母培養所用培養基中含有葡萄糖、硫酸銨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀。

11.一種豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗，其特征在于，由權利要求6所述馬克斯克魯維酵母重組工程菌株培養發酵、分離純化獲得的豬圓環病毒II型病毒樣顆粒為活性成分或活性成分之一。

12.根據權利要求11所述的豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗，其特征在于，所述疫苗選自液體注射劑、注射粉劑、注射片劑中的一種或幾種。

13.根據權利要求11所述的豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗，其特征在于，所述疫苗包括佐劑，所述佐劑選自水包油、油包水、水包油包水佐劑中的任意一種或幾種。

14.根據權利要求13所述的豬圓環病毒II型病毒樣顆粒疫苗，其特征在于，所述佐劑選自ISA201水包油包水礦物油佐劑、IMS1313水溶性納米佐劑 、GEL01新型納米侳劑中的任意一種或幾種。

15.一種權利要求11所述的豬圓環病毒II型病毒樣顆粒在制備疫苗中的應用，其特征在于，所述的豬圓環病毒II型病毒樣顆粒用于制備預防和/或治療豬圓環病毒II型病毒引發的疾病的藥物和/或疫苗，所述豬圓環病毒II型病毒引發的疾病選自：斷奶仔豬多系統衰竭綜合癥、豬皮炎腎病綜合癥、仔豬先天性震顫和母豬繁殖障礙中的任意一種或幾種。