[發(fā)明專利]一種高特異性的CRISPR基因組編輯體系

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610805040.2
• 申請日: 2016-09-06
• 公開（公告）號: CN107794272B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁秋蓉;陳彥好
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海營養(yǎng)與健康研究所
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 陳詳;馬莉華

1.一種高特異性的CRISPR基因組編輯系統(tǒng)，其特征在于，所述CRISPR基因組編輯系統(tǒng)包括：第一gRNA、第二gRNA、和Cas9蛋白；其中，所述第一gRNA靶向待編輯的靶細胞的基因組，所述第二gRNA靶向所述Cas9蛋白的編碼基因， 所述CRISPR基因組編輯系統(tǒng)包括下式(I)所示的DNA構(gòu)建物：

P1-R1-P2-R2-P3-C ，(I)

式(I)中，R1為第一gRNA編碼基因、R2為第二gRNA編碼基因、C為Cas9蛋白編碼基因，P1、P2、P3為任選地啟動子序列，“-”表示任選地的連接序列； 所述第二gRNA靶向選自下組的基因序列：SEQ ID NO.3。

2.一種用于CRISPR基因組編輯的DNA構(gòu)建物，所述DNA構(gòu)建物具有下式(I)所示的結(jié)構(gòu)：

P1-R1-P2-R2-P3-C ，(I)

式(I)中，R1為第一gRNA編碼基因，其靶向待編輯的靶細胞的基因組；R2為第二gRNA編碼基因，其靶向所述Cas9蛋白的編碼基因；C為Cas9蛋白編碼基因，P1、P2、P3為任選地啟動子序列，“-”表示任選地的連接序列；所述第二gRNA靶向選自下組的基因序列：SEQ IDNO.3。

3.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體表達權(quán)利要求1所述的CRISPR基因組編輯系統(tǒng)；或者，所述表達載體含有權(quán)利要求2中所述的DNA構(gòu)建物。

4.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的表達載體，或其基因組中整合有權(quán)利要求2所述的DNA構(gòu)建物。

5.如權(quán)利要求4所述的遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為真核細胞。

6.如權(quán)利要求4所述的遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為動物細胞。

7.一種基因組編輯方法，其特征在于，所述方法將權(quán)利要求3所述的表達載體導(dǎo)入待編輯細胞，所述方法用于非診斷和非治療性的目的。

8.如權(quán)利要求1所述的CRISPR基因組編輯系統(tǒng)、權(quán)利要求2所述的DNA構(gòu)建物、權(quán)利要求3所述的表達載體、或權(quán)利要求4所述的宿主細胞在制備基因組編輯試劑中的用途。

9.如權(quán)利要求1所述的CRISPR基因組編輯系統(tǒng)、權(quán)利要求2所述的DNA構(gòu)建物、權(quán)利要求3所述的表達載體、或權(quán)利要求4所述的宿主細胞在構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物中的用途。