[發明專利]一種生鮮乳新鮮度檢測的方法

有效

• 申請號: 201610798257.5
• 申請日: 2016-08-31
• 公開（公告）號: CN106404818B
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發明（設計）人: 楊永新;趙小偉;王強軍;齊云霞;黃冬維;程廣龍;趙輝玲
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 沈尚林

1.一種生鮮乳新鮮度檢測的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)、將采集的牛奶在干凈的環境中分裝于無菌管中，分成若干份，在4℃冰箱中按照時間梯度增加分別保存，然后將不同時間梯度的牛奶樣品進行冷凍儲存；

(2)、牛奶樣品在室溫下解凍后經離心機離心，除去脂肪層后收集清液，清液與冰浴的甲醇以1:2-3體積混合，渦旋混合均勻，超聲10-30s后再靜置20s，共10個循環，冰浴靜置5-20min后離心收集上清液，上清液用旋轉蒸發儀將甲醇除去，再用冷凍干燥儀冷凍干燥得到粉末樣品；

(3)、將粉末樣品溶于600μL-1mL磷酸鹽緩沖液，渦旋混勻后離心，取上清液至核磁管中，用核磁共振光譜儀檢測各個樣品的小分子代謝物；

(4)、多元變量統計分析小分子代謝物隨時間的變化，尋找出差異代謝物，然后繪制差異代謝物與保存時間之間的關系，其中，差異代謝物為隨著保存時間的變化而變化的小分子代謝物；

(5)、將待檢測牛奶樣品按照步驟(1)-(3)處理后，測出差異代謝物的值，然后根據關系曲線計算代謝物的相對變化量，以此來對牛奶新鮮度進行評判；

步驟(4)中差異代謝物為乳清酸或三甲胺。

2.根據權利要求1所述的生鮮乳新鮮度檢測的方法，其特征在于，所述步驟(2)中解凍后離心處理條件為2500-4000×g離心15-40min；冰浴靜置后離心處理條件為10000-15000×g離心10-30min；所述步驟(3)渦旋混勻后離心處理條件為12000-15000×g離心10-30min，所述步驟(2)和步驟(3)離心均在4-6℃環境下操作。

3.根據權利要求1所述的生鮮乳新鮮度檢測的方法，其特征在于，所述步驟(3)中磷酸鹽緩沖液由0.1M NaH₂PO₄/K₂HPO₄、0.1％NaN₃和100％D₂O組成，其PH為7.4。

4.根據權利要求 1所述的生鮮乳新鮮度檢測的方法，其特征在于，當牛奶中體細胞數為20萬以下時，乳清酸代謝物的含量隨著時間的增加而顯著下降，差異代謝物選擇乳清酸；當牛奶中體細胞數為100萬以上時，三甲胺代謝物的含量隨著時間的增加而顯著增加，差異代謝物選擇三甲胺。