[發(fā)明專利]一種高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610784087.5
• 申請(qǐng)日: 2016-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN106468689B
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜寧寧;程雪嬌;王建;王勇;焦曉軍;姜淋潔;崔志剛;王猛;甄盼盼;朱士江;楊雪;于小婷;王宇鵬;李麗琴;季昆;余貴菊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市中升挑戰(zhàn)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 天津?yàn)I海科緯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 張會(huì)雪

本發(fā)明提供了一種高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法，該方法采用Agilent 1220高效液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度70℃，氣體流速1.7L/min，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣量10μl，包括如下步驟：(1)色譜條件：色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱，流動(dòng)相為乙腈?0.5mol/L磷酸二氫鈉溶液，其中，乙腈與0.5mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積比為26:74，流速1.0ml/min，柱溫35℃。本發(fā)明所述的高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法經(jīng)過精密度試驗(yàn)、線性關(guān)系試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)等對(duì)方法進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，檢測(cè)范圍大，靈敏度和準(zhǔn)確性高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于畜牧領(lǐng)域，尤其是涉及一種高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法。

背景技術(shù)

鐵是動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育所必須的微量元素，是動(dòng)物體內(nèi)多種酶的組成部分。豬缺鐵性貧血是由于豬在生長(zhǎng)過程中缺鐵引起血液中紅細(xì)胞數(shù)、血紅細(xì)胞濃度下降。豬的生理特性決定了豬是所有動(dòng)物中最易發(fā)生缺鐵性貧血癥的動(dòng)物。當(dāng)發(fā)生缺鐵性貧血癥時(shí)可造成豬的血液攜氧能力嚴(yán)重不足，新陳代謝紊亂，抗應(yīng)激能力下降，從而引發(fā)各種疾病。缺鐵性貧血多發(fā)生天生長(zhǎng)快、個(gè)體比較壯的仔豬。

葡庚糖酐鐵是臨床使用效果較好的一種補(bǔ)鐵劑，仔豬注射葡庚糖酐鐵后紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、血清鐵蛋白顯著增加，與一般補(bǔ)鐵劑相比，葡庚糖酐鐵吸收快，鐵的利用率高，注射量少，副作用小，是治療仔豬缺鐵性貧血的有效藥物。

葡庚糖酐鐵，英文名：Gleptoferron，CAS號(hào)為57680-55-4，分子式為C13H25FeO15，分子量477.1741，棕色至棕褐色結(jié)晶性粉末，易溶于熱水，不溶于乙醇。結(jié)構(gòu)式見圖1。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法，高效、簡(jiǎn)便、靈敏度高、分離效果好、準(zhǔn)確度高。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法，該方法采用Agilent1220高效液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度70℃，氣體流速1.7L/min，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣量10μl，包括如下步驟：

(1)色譜條件：色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.5mol/L磷酸二氫鈉溶液，其中，乙腈與0.5mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積比為26:74，流速1.0ml/min，柱溫35℃；

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密稱取對(duì)照品25mg，置于50ml棕色容量瓶中，加入40ml純凈水超聲使其全部溶解，放冷后定容至刻度，作為葡庚糖酐鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液，逐級(jí)稀釋制成葡庚糖酐鐵含量為5、10、20、50、100、200、500μg/ml的溶液，分別按所述的步驟(1)的色譜條件測(cè)定，色譜柱色譜柱10μl，分別計(jì)算相同保留時(shí)間下的峰面積，以含量X為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y＝f(X)，含量在5-500μg/ml范圍；

(3)樣品處理：精密稱取供試品適量，用水稀釋制成適當(dāng)濃度的溶液，搖勻，用0.45μm有機(jī)濾頭過濾；

(4)檢測(cè)待測(cè)葡庚糖酐鐵樣品中葡庚糖酐鐵的含量：將經(jīng)過處理的待測(cè)葡庚糖酐鐵樣品注入所述的步驟(1)設(shè)置的色譜條件測(cè)定，色譜柱進(jìn)樣量10μl，計(jì)算相同保留時(shí)間下的峰面積，帶入所述的步驟(2)所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出上機(jī)待測(cè)葡庚糖酐鐵樣品溶液的濃度，再通過樣品的取樣量計(jì)算出樣品中葡庚糖酐鐵的含量。

進(jìn)一步，所述的色譜柱選擇Waters C18柱4.6*250mm，5μm或Waters C18柱4.6*150mm，5μm；優(yōu)選的，所述的色譜柱選擇Waters C18柱4.6*250mm，5μm。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的高效液相色譜測(cè)定葡庚糖酐鐵含量的方法具有以下優(yōu)勢(shì)：