[發明專利]半自動樣本處理液相色譜技術測定水溶性維生素的方法

有效

• 申請號: 201610781220.1
• 申請日: 2016-08-31
• 公開（公告）號: CN106324142B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 陳大為
• 申請（專利權）人: 陳大為
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 濟南鼎信專利商標代理事務所(普通合伙) 37245
• 代理人: 彭成

本發明公開了一種利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法，采用HPLC方法，色譜條件為：流動相A：磷酸二氫鉀溶液，流動相B：甲醇，梯度洗脫；所述多種水溶性維生素選自維生素B1、B2、B6、B9、B12、維生素C、煙酸或煙酰胺。對血清進行前處理：先用甲醇或乙腈沉淀蛋白，離心后取上清液，用半自動固相萃取儀萃取，洗脫液為甲醇水溶液，收集的柱后溶液進行氮氣吹干至合適體積。本發明采用高效液相色譜法檢測血清中多種水溶性維生素，可以實現定性與定量檢測，特異性強，靈敏性高，通量高，操作簡單，成本低，結果客觀易于分析，尤其適合臨床普及應用。

技術領域

本發明涉及一種利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法，屬于維生素檢測技術領域。

背景技術

維生素是機體維持正常代謝和機能所必須的一類低分子化合物，是人體七大營養要素之一，分為脂溶性和水溶性維生素兩類，人體內維生素必須保持在一個合適的范圍才對人體有益，無論缺乏還是升高都會給人體帶來危害。維生素B1、B2、B6、B9、B12、維生素C、煙酸、煙酰胺均屬于水溶性維生素，人體缺乏該這些維生素時會表現出不同的癥狀：B1缺乏易致腳氣病等，B2缺乏致脂溢性皮炎和口腔炎癥，B6缺乏易導致貧血，B9葉酸缺乏致胎兒神經管畸形；B12缺乏致巨幼紅細胞性貧血；煙酰胺缺乏會導致食欲不振、記憶力減退、癡呆等。

近年來，國內外對維生素認識的重要性在不斷提高，根據統計，維生素在美國保健品市場占有主要份額。隨著國際維生素市場對中國乃至亞洲市場的不斷沖擊，以及國內科研單位和企業在維生素行業取得的科研成果和技術突破，我國公民自身的保健意識不斷增強，隨著居民收入水平提高，人們開始補充各類維生素。但是，由于缺乏科學的指導，維生素產品的使用現狀很混亂，一些人群為了提高身體各項機能，不惜花重金在保健品上，盲目補充維生素，據2014年中國營養學會調查顯示，中國居民由于營養過剩或營養不均衡導致的疾病在逐年增多。如何了解人體是否需要補充所必需的水溶性維生素，只有通過檢測體內各種維生素的真實狀態，根據檢測結果有針對性的調整需要的維生素，檢測是科學評估和個性化使用維生素唯一的依據。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法，采用HPLC方法，色譜條件為：流動相A：0.5mol/L的磷酸二氫鉀溶液(在流動相中加入磷酸二氫鉀有利于提高分離度，使各種維生素能夠較好的分離)，流動相B：甲醇，梯度洗脫；所述水溶性維生素選自維生素B1、B2、B6、B9、B12、維生素C、煙酸、煙酰胺中任意三種以上。

所述血清，進行以下前處理：先用甲醇或乙腈沉淀蛋白(優選乙腈)，離心后取上清液，用半自動固相萃取儀萃取(現有技術中已有的常規設備)，洗脫液為：甲醇水溶液，對收集的柱后溶液進行氮氣吹干至合適體積，然后進樣分析。

進一步地，色譜條件為：柱溫：30℃；色譜柱:Waters XBridge C183.5um 4.6*250mm；進樣體積：20uL；梯度洗脫條件為：0-5min A:B＝90:10，5-7min過渡B為50％，7-12min A：B＝50:50,12-14min過渡B為30％，14-18min A：B＝70:30，18-22min過渡B為10％，如表1所示，流速：0.9mL/min；波長為260nm。

表1梯度洗脫條件