[發明專利]半自動樣本處理液相色譜技術測定水溶性維生素的方法

有效

• 申請號: 201610781220.1
• 申請日: 2016-08-31
• 公開（公告）號: CN106324142B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 陳大為
• 申請（專利權）人: 陳大為
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 濟南鼎信專利商標代理事務所(普通合伙) 37245
• 代理人: 彭成

1.一種利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法，其特征在于：采用HPLC方法；所述水溶性維生素為維生素B1、B2、B6、B9、B12、維生素C、煙酸和煙酰胺；所述血清進行以下前處理：先用甲醇或乙腈沉淀蛋白，離心后取上清液，用半自動固相萃取儀萃取，洗脫液為：甲醇水溶液，收集的柱后溶液進行氮氣吹干至合適體積，然后進樣分析；

色譜條件為：柱溫：30℃；色譜柱:Waters XBridge C18 3.5um 4.6*250mm；進樣體積：20uL；流動相A：磷酸二氫鉀溶液，流動相B：甲醇；梯度洗脫條件為：0-5min A:B＝90:10，5-7min過渡B為50％，7-12min A：B＝50:50,12-14min過渡B為30％，14-18min A：B＝70:30，18-22min過渡B為10％，流速：0.9mL/min；波長為260nm。

2.根據權利要求1所述的利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法，其特征在于：步驟如下：

(1)樣品前處理：向血清樣本中加入等體積的乙腈，渦旋震蕩后離心，取上清液至半自動固相萃取儀，用甲醇水溶液洗脫；收集的柱后溶液氮氣吹干至合適體積；

(2)標準工作液的配制：配制多種水溶性維生素的標準工作液，備用；

(3)HPLC檢測：將待測樣本通過梯度洗脫模式進入色譜柱分離后，在260nm檢測波長下，對待測物質進行定性與定量檢測。

3.根據權利要求2所述的利用半自動樣本處理液相色譜技術同時測定血清中多種水溶性維生素的方法，其特征在于：所述標準工作液的配制具體如下：以水配制100μg/mL各維生素標準品儲備液，然后用濃度為5％的BSA甲醇溶液制備不同濃度梯度的標準溶液。