[發明專利]一種PLA2R?THSD7A融合蛋白及其應用和試劑盒

有效

• 申請號: 201610770500.2
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN106432508B
• 公開（公告）日: 2017-12-05
• 發明（設計）人: 熊祖應;王洪濤;林俊;劉堯;張永頂;張大準;張巧;馬偉民
• 申請（專利權）人: 深圳市伯勞特生物制品有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;G01N33/68;G01N33/564
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙)44285
• 代理人: 王仲凱

技術領域

本發明涉及醫學領域，特別涉及一種PLA2R-THSD7A融合蛋白及其應用和試劑盒。

背景技術

原發性膜性腎小球腎炎(pMGN)，又稱為特發性膜性腎病(IMN)，是一種腎小球慢性炎癥性疾病，是腎病綜合征中常見的腎病類型之一。該病典型的特征是蛋白尿，隨著尿蛋白含量的增加，有腎衰竭發展趨勢。大多數的pMGN病人表現有腎病綜合征，有的伴有水腫，體重增加，小便減少。pMGN與繼發性膜性腎小球腎炎(sMGN)不同，sMGN是繼發性疾病或并發性疾病。藥物治療、濫用毒品、感染性疾病、其他的自身免疫疾病和腫瘤都可能導致sMGN的發生。同時，sMGN可以隨著根本疾病的治療而好轉。MGN的“金標準”為腎臟穿刺，腎組織的病理學和電鏡檢查。診斷的標志是免疫復合物在腎小球基底膜外側的沉積。

越來越多的證據顯示IMN是一種自身免疫疾病，已經發現的自身免疫抗原磷脂酶A2受體(PLA2R)和1型血小板反應蛋白7A域(THSD7A)對IMN的診斷都有一定的診斷價值。據報道，IMN病人血清中抗PLA2R IgG自身抗體陽性率為70％-75％，而在健康人、系統性紅斑狼瘡病人或其他腎病患者未檢出，另外，IMN病人血清中THSD7A抗體的陽性率為5％-10％。多篇專利文獻中也顯示了這兩種抗原在自發性膜性腎病診斷中的應用，如：

CN 102159951 B專利中公開了利用PLA2R抗原進行自發性膜性腎病(MN)的免疫分析、制備試劑、治療劑以及診斷和預后評估方法。通過酶聯免疫吸附分析、濁度測量免疫分析等免疫分析針對PLA2R為反應性的血清自身抗體，達到對膜性腎病的診斷及預后評估。

WO 2016/012542 A1專利中公開了利用THSD7A抗原進行自發性膜性腎病(MN)的免疫分析、制備試劑、治療劑以及診斷和預后評估方法。通過酶聯免疫吸附分析、濁度測量免疫分析等免疫分析針對PLA2R為反應性的血清自身抗體，達到對膜性腎病的診斷及預后評估。

WO2015185949 A1中公開了對PLA2R的主要抗原表位的多肽序列的研究及其在預防、治療腎病中的用途。

PLA2R和THSD7A是自發性膜性腎病的兩個自身抗原，對自發性MN的檢出率分別為70％-75％和5％-10％，單獨使用時都有一定的漏檢率。因此，急需提供一種能夠提高IMN的檢出率，增加檢測敏感性的方法。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種PLA2R-THSD7A融合蛋白及其應用和試劑盒。該融合蛋白可顯著提高IMN的檢出率。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種融合蛋白，融合蛋白包括與磷脂酶A2受體(PLA2R)至少85％序列同源的第一區和與1型血小板反應蛋白7A域(THSD7A)至少85％序列同源的第二區。

本研究發現，PLA2R和THSD7A兩種抗體在IMN患者中僅有1％同時出現的概率，其余情況是相互排斥的出現的。了解了這一特點之后，本發明利用基因工程的方法構建一個包含PLA2R和THSD7A抗原多肽的融合蛋白，通過這種新蛋白檢測MN患者樣品中相關自身抗體的水平。該融合蛋白能與來自受試者樣品中的相關抗體結合形成抗體-蛋白質復合物，并且該復合物可被測量。

與已有的PLA2R和/或者THSD7A單獨檢測的方法相比，這種新的融合蛋白抗體的檢測能提高自發性MN的檢出率，增加檢測的敏感性，同時，創造性的提供了一種新穎的針對自發性MN的快速、精確、成本低、安全以及簡便的方法。

在本發明提供的一些實施例中，與磷脂酶A2受體至少85％序列同源的第一區位于融合蛋白的N端，與1型血小板反應蛋白7A域至少85％序列同源的第二區位于融合蛋白的C端。

在本發明提供的另一些實施例中，與磷脂酶A2受體至少85％序列同源的第一區位于融合蛋白的C端，與1型血小板反應蛋白7A域至少85％序列同源的第二區位于融合蛋白的N端。

作為優選，融合蛋白包括與磷脂酶A2受體氨基酸序列相同的第一區和與1型血小板反應蛋白7A域氨基酸序列相同的第二區。

在本發明提供的一些實施例中，與磷脂酶A2受體氨基酸序列相同的第一區位于融合蛋白的N端，與1型血小板反應蛋白7A域氨基酸序列相同的第二區位于融合蛋白的C端。

在本發明提供的另一些實施例中，與磷脂酶A2受體氨基酸序列相同的第一區位于融合蛋白的C端，與1型血小板反應蛋白7A域氨基酸序列相同的第二區位于融合蛋白的N端。

本發明還提供了編碼該融合蛋白的基因。