[發(fā)明專利]專門用于快速大量提取口腔上皮細(xì)胞DNA的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610769029.5
• 申請(qǐng)日: 2016-08-30
• 公開（公告）號(hào): CN107794255A
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫麟;馬潔;張同
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市康婷生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種專門用于快速大量提取口腔上皮細(xì)胞DNA的方法，其特征在于：步驟如下：

⑴收集樣品細(xì)胞

用2個(gè)口腔拭子分別刮取口腔左右兩側(cè)的口腔上皮細(xì)胞，并把拭子頭轉(zhuǎn)移到2個(gè)含1ml去離子水的1.5ml的離心管中；震動(dòng)離心管，使細(xì)胞從拭子上盡可能多的脫落，然后將2個(gè)含有口腔上皮細(xì)胞的1.5ml管離心，轉(zhuǎn)速：800×g，時(shí)間：2分鐘；吸棄上清液，每個(gè)EP管加入500μl的無菌水，將其中一個(gè)EP管的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)EP管中，離心，轉(zhuǎn)速：800×g，時(shí)間：2分鐘；

⑵裂解細(xì)胞

吸棄上清液，向每管中加入500μl的溶液A，溶液A含9.5mmol/L的Tris-Cl，2mmol/L的EDTA，1％的SDS，3％的Triton-100，pH＝8.5，加后加入50μl濃度為1mg/ml的蛋白酶K溶液，渦旋振蕩10秒鐘，放入55℃水浴內(nèi)15分鐘；每5分鐘振蕩一次；

⑶去除蛋白

短暫離心，將管壁上的殘留液體離至管底；加入200μl的醋酸鈉-冰醋酸溶液，劇烈振蕩20秒鐘，管中出現(xiàn)白色絮狀物；12000×g離心3分鐘，使白色物質(zhì)沉淀到離心管底部；

⑷沉淀DNA

吸取400-500μl的上清液到新的EP管中，加入800μl溶液B，溶液B組成為無水乙醇：異丙醇＝1:3，振蕩10秒鐘，使上清液與異丙醇充分混合；12000×g離心3分鐘；

⑸乙醇洗滌

吸棄上清，加入800μl的75％乙醇，振蕩5秒鐘，12000×g離心2分鐘；吸棄上清，重復(fù)上述步驟一次；

⑹溶解DNA

小心吸棄上清，室溫下敞口干燥10分鐘；將DNA溶解到100μl的無菌水中；

⑺保存DNA

將DNA樣品做好標(biāo)記，放于指定位置-20℃或-80℃中保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的專門用于快速大量提取口腔上皮細(xì)胞DNA的方法，其特征在于：所述醋酸鈉-冰醋酸溶液為3M的Na⁺，5M的Ac^-。