[發明專利]一種細胞保存液及其在流式樣本保存中的應用

有效

• 申請號: 201610768294.1
• 申請日: 2016-08-30
• 公開（公告）號: CN106386785B
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發明（設計）人: 倪萬茂
• 申請（專利權）人: 浙江博真生物科技有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N33/533;G01N33/574
• 代理公司: 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙)11348
• 代理人: 侯蔚寰

1.細胞保存液，其pH7.2～7.5，其中溶質由Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、KCl、聚乙二醇和氯化鉻以及任選的抗凝劑組成。

2.權利要求1所述的細胞保存液，其中抗凝劑是EDTA或其鹽。

3.權利要求2所述的細胞保存液，其中鹽是鉀鹽。

4.權利要求1所述的細胞保存液，其中每種組分的含量如下：Na₂HPO₄ 10mmol/L、KH₂PO₄2mmol/L、NaCl 137mmol/L、KCl 2.7mmol/L、聚乙二醇10-20％(wt)、氯化鉻0.1％-1％(wt)。

5.權利要求1所述的細胞保存液，其中抗凝劑的含量為15～22g/L。

6.權利要求1～5之一所述的細胞保存液的制備方法，其包括將Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、KCl、聚乙二醇和氯化鉻以及任選的抗凝劑混合的步驟。

7.權利要求6所述的制備方法，其進一步包括混合后進行過濾和/或分裝的步驟。

8.權利要求7所述的制備方法，其中分裝是分裝成200μl/管。

9.保存含有細胞的樣本的方法，其包括：

(1)提供含有細胞的樣本液；

(2)任選將抗凝劑與所述樣本液混合；

(3)將權利要求1～5之一所述的細胞保存液與所述樣本液混合，其中所述細胞保存液與所述樣本液的體積比≥1:10；

(4)將步驟(3)獲得的混合物保存。

10.權利要求9所述的方法，其中步驟(1)中的樣本液是血液、骨髓或細胞懸浮液。

11.權利要求9所述的方法，其中步驟(3)中的體積比為1:5～10。

12.權利要求9所述的方法，其中步驟(4)中的保存是保存于2～8℃保存。

13.權利要求9所述的方法，其中步驟(4)中的保存的保存期為3天以上。

14.權利要求13所述的方法，其中步驟(4)中的保存的保存期為5天以上。

15.權利要求14所述的方法，其中步驟(4)中的保存的保存期為10天以上。

16.權利要求15所述的方法，其中步驟(4)中的保存的保存期為15天、30天或49天。

17.權利要求9～16之一所述的方法獲得的保存產物。

18.權利要求17所述的保存產物在制備用于用流式細胞儀檢測的方法的試劑盒中的應用。

19.權利要求18所述的應用，其中，所述用流式細胞儀檢測的方法是白血病和淋巴瘤分型的方法。

20.權利要求19所述的應用，其中，所述白血病和淋巴瘤分型的方法包括：

(1)進行權利要求9～16之一所述的方法；

(2)將步驟(1)的方法獲得的保存產物等分，分別與由抗CD45抗體、抗CD13抗體、抗CD33抗體和抗CD7抗體組成的抗體組合物和由抗CD45抗體、抗CD117抗體、抗CD34抗體和抗CD19抗體組成的抗體組合物混合入兩根流式管，混勻后孵育；

(3)向步驟(2)孵育的兩根流式管加入紅細胞裂解液，混勻后孵育，離心，去上清并重懸；和，

(4)四色流式細胞儀檢測步驟(3)重懸的兩根流式管，并計算結果。

21.權利要求20所述的應用，其中計算結果是計算抗以下細胞表面抗原的抗體對的熒光結果：CD33vs CD13、CD33vs CD7、CD7vs CD13、CD117vs CD34、CD117vs CD19和CD19vs CD34。

22.權利要求19所述的應用，其中白血病和淋巴瘤是多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征、急性B淋巴細胞白血病、急性T淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病M3型、急性髓細胞白血病M5型、邊緣帶淋巴瘤、T大顆粒淋巴細胞白血病和慢性B淋巴細胞白血病。