[發明專利]一種利用復合材料二次固定化漢遜德巴利酵母的方法有效
| 申請號： | 201610767902.7 | 申請日： | 2016-08-23 |
| 公開（公告）號： | CN106967708B | 公開（公告）日： | 2020-08-18 |
| 發明（設計）人： | 董玉瑋;高明俠;王陶;張傳麗 | 申請（專利權）人： | 徐州工程學院 |
| 主分類號： | C12N11/14 | 分類號： | C12N11/14;C12N11/10;C12N11/084;C12N11/04;C12R1/645 |
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| 地址： | 221111 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 復合材料 二次 固定 化漢遜德巴利 酵母 方法 | ||
1.一種利用復合材料二次固定化漢遜德巴利酵母的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、將漢遜德巴利酵母依次經種子斜面培養基活化、發酵培養基培養后，通過無菌紗布過濾分離漢遜德巴利酵母液體發酵菌種和發酵培養基，得漢遜德巴利酵母液體發酵菌種液；
S2、將海藻酸鈉、活性炭的混合物與所得的漢遜德巴利酵母液體發酵菌種按照0.5∶1-1∶1(w/v)比例混合，得混合液；其中，海藻酸鈉終濃度為25-35g/L，活性炭終濃度為8-10g/L；
S3、用注射器吸取混合液滴入濃度為19-21g/L的CaCl2溶液內，室溫固定1-3h，得直徑0.3-0.5cm的固定化漢遜德巴利酵母小球，無菌紗布過濾分離小球后無菌水清洗2次；
S4、按照2-3個小球/mg過濾后的菌種的標準，將步驟S3所得的漢遜德巴利酵母小球與過濾分離后的上述S1步驟的液體發酵菌種混合，再加入聚乙烯醇和海藻酸鈉并混勻，聚乙烯醇終濃度為80-100g/L，海藻酸鈉終濃度在9-11g/L；用直徑0.8cm吸管吸取混合液滴入濃度為9-11g/L的CaCl2溶液內，室溫固定1-3h，4℃冰箱固定1-3h，得直徑0.8-1.2cm的固定化漢遜德巴利酵母小球，無菌紗布過濾分離小球后無菌水清洗2次；
S5、將步驟S4所得的漢遜德巴利酵母小球加入到80-120ml液體發酵培養基/250ml錐形瓶培養，28-32℃，在轉速為220-280r/min的恒溫振蕩箱中培養48-72h；
第一次固定化后漢遜德巴利酵母小球直徑為0.3cm，第二次固定化后漢遜德巴利酵母小球直徑為1.2cm。
2.如權利要求1所述的一種利用復合材料二次固定化漢遜德巴利酵母的方法，其特征在于，所述步驟S2中海藻酸鈉、活性炭的混合物與所得的漢遜德巴利酵母液體發酵菌種的混合比例為1∶1(w/v)。
3.如權利要求1所述的一種利用復合材料二次固定化漢遜德巴利酵母的方法，其特征在于，第一次固定化所用海藻酸鈉終濃度為30g/L，第二次固定化所用海藻酸鈉終濃度為10g/L。
4.如權利要求1所述的一種利用復合材料二次固定化漢遜德巴利酵母的方法，其特征在于，第一次固定化所用CaCl2溶液的濃度為21g/L，第二次固定化所用CaCl2終濃度為10g/L。
5.如權利要求1所述的一種利用復合材料二次固定化漢遜德巴利酵母的方法，其特征在于，第一次固定化所用活性炭終濃度為8g/L，第二次固定化所用聚乙烯醇終濃度為90g/L。
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