[發(fā)明專利]一種重組長(zhǎng)效雞干擾素α的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610756022.X
• 申請(qǐng)日: 2016-08-29
• 公開（公告）號(hào): CN106282216B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙雨;李樹啟;馬騰飛;符修樂;戚仕梅;高耀輝;賴鵬飛;王利利;汪良青;周煒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N1/21;C07K14/56;C12R1/19
• 代理公司: 蕪湖思誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34138
• 代理人: 楊濤

本發(fā)明涉及一種重組長(zhǎng)效雞干擾素α的制備方法，包括：(1)長(zhǎng)效雞干擾素α基因的獲取；(2)所述長(zhǎng)效雞干擾素α基因連接至原核表達(dá)載體pET?28a上獲得表達(dá)載體；(3)所述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得基因工程菌；(4)所述基因工程菌用IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)長(zhǎng)效雞干擾素α；(5)重組長(zhǎng)效雞干擾素α粗制品的制備；(6)重組長(zhǎng)效雞干擾素α粗制品的純化。采用該方法制備的重組長(zhǎng)效雞干擾素α純度高、活性強(qiáng)、半衰期長(zhǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因重組技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種重組長(zhǎng)效雞干擾素α(RecombinantLong-acting chicken interferonα，rLaChIFNα)的制備方法。

背景技術(shù)

隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)已由農(nóng)村家庭副業(yè)發(fā)展成了社會(huì)一大產(chǎn)業(yè)，雞的品種和數(shù)量都位于世界前列。正是這迅猛的發(fā)展，進(jìn)而伴隨著很多問題，雞的病毒病日益明顯，如禽流感、雞傳染性法氏囊病、雞傳染性支氣管炎、馬立克氏病和雞新城疫等傳染性疾病，每年都會(huì)在不同的季節(jié)不同程度的暴發(fā)，感染發(fā)病后，初發(fā)病急、臨床癥狀嚴(yán)重、極易傳播擴(kuò)散以及病死率和死亡率均較高的特點(diǎn)，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失；不僅如此，因雞與人類生活密切相關(guān)，某些病毒性傳染病如禽流感等還會(huì)給人類健康帶來(lái)潛在威脅。

目前雞病毒性疾病的防治主要采用疫苗免疫和藥物治療，由于疫苗免疫的血清型單一，而病毒的血清型復(fù)雜，毒株變異快，常導(dǎo)致疫苗免疫失敗。而一些病毒病甚至目前尚無(wú)疫苗可用。而藥物治療主要使用抗生素，但近年來(lái)抗生素的廣泛大量使用導(dǎo)致耐藥性菌株大量產(chǎn)生，并通過(guò)食物鏈傳染給人，進(jìn)而給人類健康帶來(lái)更大的威脅。我國(guó)從16年開始明令禁止一些抗生素和抗菌劑在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。因此，使用干擾素來(lái)替代或者部分取代抗生素來(lái)積極治療和預(yù)防家禽、家畜的病毒性疾病是目前最為關(guān)注的問題。

干擾素是1957年由Issacs和Lindeman首先發(fā)現(xiàn)的一類由病毒及脂多糖等物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的多功能的細(xì)胞因子，與細(xì)胞受體結(jié)合后，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多種特異性蛋白質(zhì)和酶類，主要通過(guò)抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄和降解病毒RNA來(lái)抑制病毒的生長(zhǎng)繁殖及發(fā)揮抗腫瘤等的活性。按照干擾素的產(chǎn)生細(xì)胞、生化特征及在機(jī)體免疫方面所發(fā)揮的作用不同，分為α、β、γ三種型。現(xiàn)已知，干擾素α在體內(nèi)可有選擇性地作用于病毒感染細(xì)胞，通過(guò)抑制受染細(xì)胞內(nèi)的病毒蛋白質(zhì)的生物合成，發(fā)揮廣譜和高效抗病毒作用，但對(duì)正常宿主細(xì)胞無(wú)作用。

天然干擾素及人工重組干擾素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般為2-4個(gè)小時(shí)。半衰期短給治療帶來(lái)了極大的不便，治療次數(shù)的增加，相應(yīng)的時(shí)間成本及經(jīng)濟(jì)成本隨之增加，而機(jī)體的耐受極限也有可能被突破導(dǎo)致不良反應(yīng)的產(chǎn)生。半衰期短的主要原因有兩個(gè)：干擾素的分子量過(guò)小在體內(nèi)代謝過(guò)快，干擾素尤其是重組干擾素親和力較差被免疫系統(tǒng)清除。而市面上常見的長(zhǎng)效干擾素以聚乙二醇融合干擾素為代表，僅在分子量的層面上部分解決了干擾素分子量小而導(dǎo)致半衰期短的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一是提供一種重組長(zhǎng)效雞干擾素α的制備方法，使得利用該方法制備的重組長(zhǎng)效雞干擾素α純度高、活性強(qiáng)、半衰期長(zhǎng)。

本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供一種基因工程菌，利用該工程菌可以表達(dá)重組長(zhǎng)效雞干擾素α。

本發(fā)明還解決一個(gè)技術(shù)問題：提供一種重組長(zhǎng)效雞干擾素α。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出如下技術(shù)方案：

一種重組長(zhǎng)效雞干擾素α的制備方法，其特征在于所述的方法由下列步驟組成：

(1)長(zhǎng)效雞干擾素α基因的獲取，所述長(zhǎng)效雞干擾素α基因的核苷酸序列如Seq IDNO.3所示；(2)所述長(zhǎng)效雞干擾素α基因連接至原核表達(dá)載體pET-28a上獲得表達(dá)載體；(3)所述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得基因工程菌；(4)所述基因工程菌用IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)長(zhǎng)效雞干擾素α；(5)重組長(zhǎng)效雞干擾素α粗制品的制備；(6)重組長(zhǎng)效雞干擾素α粗制品的純化。