[發明專利]一種基于膜的生物樣品化學發光檢測方法和相關檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610755459.1
• 申請日: 2016-08-26
• 公開（公告）號: CN107782721A
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 韋彥余;王軍峰
• 申請（專利權）人: 韋彥余
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/576;G01N33/68;G01N33/76
• 代理公司: 上海唯源專利代理有限公司31229
• 代理人: 曾耀先

技術領域

本發明涉及生物樣品檢測技術領域，特別涉及生物樣品化學發光檢測技術領域，具體是指一種基于膜的生物樣品化學發光檢測方法和相關檢測試劑盒。

背景技術

化學發光是物質在進行化學反應過程中伴隨的一種光輻射現象?；瘜W發光免疫分析是將高靈敏度的化學發光技術和高特異性的免疫反應結合起來的先進免疫診斷技術，具有靈敏度高、特異性強、線性范圍寬等特點，主要應用在醫院的檢驗科，進行傳染病診斷、腫瘤診斷、內分泌功能診斷、心血管疾病診斷和優生優育診斷等。

免疫診斷技術先后經歷了放射性免疫、膠體金、酶聯免疫、時間分辨熒光法和化學發光免疫階段?；瘜W發光免疫技術相比其他技術，具有定量檢測、靈敏度高、寬的線性范圍、自動化程度高等優勢，已經成為免疫診斷技術的主流。

目前臨床檢測使用的免疫化學發光主要包括：

基于96孔微孔板的化學發光酶免疫測定，該方法優點在于成本較低，缺點在于反應速度慢，穩定性較差；

基于磁微粒的化學發光酶免疫測定，該方法優點在于反應速度較快，缺點在于穩定性較差，成本較高；

基于磁微粒的化學發光免疫測定，由于直接標記化學發光劑，并結合磁微粒技術，該方法優點在于反應速度較快，穩定，缺點在于成本較高；

電化學發光免疫測定，該方法優點在于準確性及穩定性很好，缺點在對于儀器及試劑均有很高的要求，成本高。

因此，需要提供一種生物樣品化學發光檢測方法，其不僅檢測快速、準確、穩定，而且成本低。

發明內容

為了克服上述現有技術中的缺點，本發明的一個目的在于提供一種基于膜的生物樣品化學發光檢測方法，其不僅檢測快速、準確、穩定，而且成本低，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種基于膜的生物樣品化學發光檢測方法，其設計巧妙，操作簡便，既具有基于磁微粒的化學發光檢測方法的優點，又具有基于96孔微孔板的化學發光酶免疫測定的優點，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種基于膜的生物樣品化學發光檢測試劑盒，其不僅檢測快速、準確、穩定，而且成本低，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種基于膜的生物樣品化學發光檢測試劑盒，設計巧妙，結構簡潔，操作簡便，既具有基于磁微粒的化學發光檢測方法的優點，又具有基于96孔微孔板的化學發光酶免疫測定的優點，適于大規模推廣應用。

為達到以上目的，在本發明的第一方面，提供了一種基于膜的生物樣品化學發光檢測方法，其特點是，包括以下步驟：

(1)將第一檢測物包被在膜上；

(2)使待檢測生物樣品與所述膜接觸，所述第一檢測物與所述待檢測生物樣品中的被檢測物結合形成第一復合體；

(3)使第二檢測物與所述膜接觸，所述第二檢測物標記有化學發光劑或底物為化學發光底物的酶，所述第二檢測物與所述第一復合體中的所述被檢測物結合形成第二復合體；

(4)加入啟動發光劑，如果所述第二檢測物標記有所述酶，則還需加入所述化學發光底物，所述啟動發光劑用于使所述化學發光劑或所述化學發光底物發光，然后進行化學發光測量。

所述膜可以是任何合適的膜，例如塑料膜或纖維素膜，所述塑料膜例如是聚乙烯膜、聚氯乙烯、尼龍膜等，較佳地，所述膜是聚偏氟乙烯膜、尼龍膜、硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜或DEAE纖維素膜。

將第一檢測物包被在膜上可以采用合適的結構，較佳地，采用親和素將所述膜親和素化，采用生物素標記所述第一檢測物，所述第一檢測物通過所述生物素和所述親和素反應包被在所述膜上。

所述被檢測物、所述第一檢測物和所述第二檢測物可以是任何合適的物質，較佳地，所述被檢測物是生物標志物，所述第一檢測物是用于檢測所述生物標志物的第一抗原、第一抗體或第一核酸，所述第二檢測物是用于檢測所述生物標志物的第二抗原、第二抗體或第二核酸。

所謂生物標志物(Biomarker)是指可以標記系統、器官、組織、細胞及亞細胞結構或功能的改變或可能發生的改變的生化指標，具有非常廣泛的用途。

所述生物標志物、所述第一檢測物和所述第二檢測物可以是任何合適的物質，更佳地，所述生物標志物是C反應蛋白，所述第一檢測物是第一C反應蛋白抗體，所述第二檢測物是第二C反應蛋白抗體；所述生物標志物是人絨毛膜促性腺激素，所述第一檢測物是第一人絨毛膜促性腺激素抗體，所述第二檢測物是第二人絨毛膜促性腺激素抗體；或者，所述生物標志物是乙肝核心抗體，所述第一檢測物和所述第二檢測物均為乙肝核心抗原。