[發明專利]一種提高苦瓜離體胚挽救成苗的方法

有效

• 申請號: 201610753075.6
• 申請日: 2016-08-29
• 公開（公告）號: CN106359089B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 陳小鳳;黃如葵;梁家作;馮誠誠;劉杏連;黃熊娟;黃玉輝;陳振東;秦健;宋煥忠;陳明周
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院蔬菜研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/02
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司11279
• 代理人: 朱志寬

技術領域

本發明屬于生物技術育種技術領域，特別涉及一種提高苦瓜離體胚挽救成苗的方法。

背景技術

苦瓜離體胚挽救是苦瓜種質創制的重要途徑之一。該方法可用于遠緣雜交，利用具有相關抗性的資源來改良栽培品種，通過轉育相關基因提高抗病性，而具有綜合抗性好的資源一般為葫蘆科中與苦瓜不同屬的資源或苦瓜屬中不同種的資源。這些資源與常規栽培種進行雜交，往往產生胚敗育的現象，不能成功獲得雜交種，需要在胚敗育前進行挽救。苦瓜離體胚挽救也可用于誘變育種，用輻照過已受損傷的花粉來刺激子房膨大，剖開膨大的果實取種子進行離體胚挽救來獲得再生苗。苦瓜在離體培養的過程中，容易愈傷化，即使是在沒有激素的MS培養基中也一樣產生愈傷現象，愈傷化的組織極難分化不定芽，常是多次繼代后褐化死亡。在進行胚挽救時，既要考慮胚挽救效果，又要考慮胚挽救時期，太早由于種子屬于活動旺盛的分生組織，培養易愈傷化，種子也難從果實中分離出來，增加培養難度，降低出苗率。太晚，胚已敗育，不能獲得植株。

因此，胚挽救時期、接種方式和防止種子愈傷化的方法是提高苦瓜胚挽救成苗的關鍵。目前，有關苦瓜離體胚挽救成苗的方法的研究還未見有相關報道。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

針對現有苦瓜離體胚挽救的不足，本發明公開了一種提高苦瓜離體胚挽救成苗的方法，解決苦瓜遠緣雜交胚敗育問題，提高輻射花粉授粉離體胚的成苗率，推進苦瓜抗性育種進程。

為了實現上述目的，本發明是采用以下技術方案實現：

一種提高苦瓜離體胚挽救成苗的方法，包括以下步驟：

(1)授粉：為遠緣雜交授粉或輻射花粉授粉；

(2)胚挽救時期：取授粉后第5～10d的果實；

(3)種子培養前處理：在無菌條件下，剖開果實取出種子，將種子置于MS培養基中，并于暗培養條件下培養10～15d；

(4)接種方式：前處理結束后，切掉大部分種子，保留1/4含胚部分，放入MS培養基中培養，經7～20d光培養后，挑出綠胚并繼續放MS培養基中培養，直至胚萌發成苗；

(5)增殖培養：將含有子葉、真葉的苗，切掉頂芽并置于MS培養基培養，待子葉的腋芽長出后，切下腋芽繼續置于MS培養基中培養；

(6)生根培養：將未生根的苗置于生根誘導培養基進行生根誘導，將已生根的苗直接進行移栽前處理；

(7)移栽前處理：將已生根的苗煉苗5～7d后，取出生根苗，洗凈培養基，栽入基質中，蓋膜保溫保濕，溫度25～30℃，濕度90～95％；

(8)移栽：掀開膜后保持基質濕潤，噴1次營養液，以葉面不滴水珠為止，待根系發育成側根發達的根團時，即可移栽定植。

作為優選，步驟(1)中所述的遠緣雜交授粉為：把次日要開放的待改良的雌花套袋隔離，次日早上8～10時，采集當日開放、抗性好資源的雄花給套袋的雌花授粉，授粉后繼續套袋隔離至座果，獲得膨大果實。

作為優選，所述抗性好的資源指葫蘆科中與苦瓜不同屬的資源或苦瓜屬中不同種的資源。

作為優選，步驟(1)中所述的輻射花粉授粉為：于早上8～10時采集次日開放的雄花，裝入防水袋中，即進行C0⁶⁰y射線輻射，輻射劑量為150GY；并于取雄花當天下午把要授粉的雌花套袋，用輻照過的花粉授粉并作好標記，繼續套袋隔離至座果，獲得膨大果實。

作為優選，步驟(3)中暗培養條件為溫度24～28℃，光照時間0h/d。

作為優選，步驟(4)中光培養條件為溫度24～28℃，光強2000Lux，光照時間8h/d。

作為優選，步驟(6)中所述的生根誘導培養基為1/2MS+IBA 0.05mg/L。

作為優選，步驟(7)中的基質是由蛭石和苦瓜專用基質按照體積比為1：1組成。

作為優選，步驟(8)中的營養液為大量元素減半的MS培養基。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

(1)本發明的方法可減少嫩種子的愈傷率，使胚挽救時期提前至授粉后第5d；通過暗培養處理使種子處于失綠狀態，幼胚周圍的液體消失，沒有胚部分的種殼變得中空，不跟幼胚爭奪養分，且由于失綠而減少愈傷率。