[發明專利]固定化賴氨酸脫羧酶、其制備、1,5-戊二胺制備方法及產品

有效

• 申請號: 201610726632.5
• 申請日: 2016-08-25
• 公開（公告）號: CN107779446B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 徐冠珠;于麗珺;劉修才
• 申請（專利權）人: 上海凱賽生物技術股份有限公司;CIBT美國公司;凱賽（太原）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/12
• 分類號: C12N11/12;C12N11/084;C12P13/00
• 代理公司: 北京律智知識產權代理有限公司 11438
• 代理人: 于寶慶;王瑩

1.一種固定化賴氨酸脫羧酶，其特征在于，包括重氮基修飾的高分子載體和賴氨酸脫羧酶；其中，所述賴氨酸脫羧酶通過與所述重氮基修飾的高分子載體上的重氮基反應形成共價鍵，固定于所述高分子載體之上；其中，所述重氮基修飾的高分子載體由含苯胺基的高分子物質與重氮基化試劑經重氮化反應得到；其中，所述重氮化反應為所述含苯胺基的高分子物質上的苯胺基與重氮化試劑的反應；其中，所述含苯胺基的高分子物質為含羥基的高分子物質與含苯胺基的醚化劑經醚化反應得到的物質；其中，所述含羥基的高分子物質為選自由聚乙烯醇、醋酸纖維素水解產物、丁酸纖維素水解產物組成的組的一種或其組合；其中，所述重氮基化試劑為亞硝酸，或，亞硝酸鹽和強酸的混合物；并且其中，所述固定化賴氨酸脫羧酶的制備方法包括以下步驟：將重氮基修飾的高分子載體與賴氨酸脫羧酶在緩沖溶液中反應；其中，所述緩沖溶液的離子濃度為0.01-2.0mol/L，所述緩沖溶液的pH值為7-11。

2.根據權利要求1所述的固定化賴氨酸脫羧酶，其特征在于，所述含苯胺基的醚化劑為對β-硫酸酯乙砜基苯胺。

3.根據權利要求1所述的固定化賴氨酸脫羧酶，其特征在于，所述亞硝酸鹽為亞硝酸鈉和/或亞硝酸鉀。

4.根據權利要求1所述的固定化賴氨酸脫羧酶，其特征在于，所述強酸為鹽酸和/或硫酸。

5.一種固定化賴氨酸脫羧酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：將重氮基修飾的高分子載體與賴氨酸脫羧酶在緩沖溶液中反應即可；其中，將含苯胺基的高分子物質與重氮化試劑經重氮化反應得重氮基修飾的高分子載體；其中，將含羥基的高分子物質與含苯胺基的醚化劑經醚化反應得到含苯胺基的高分子物質；其中，所述含羥基的高分子物質為選自由聚乙烯醇、醋酸纖維素水解產物、丁酸纖維素水解產物組成的組的一種或其組合；其中，所述重氮基化試劑為亞硝酸，或，亞硝酸鹽和強酸的混合物；并且其中，所述緩沖溶液的離子濃度為0.01-2.0mol/L，所述緩沖溶液的pH值為7-11。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，

所述賴氨酸脫羧酶的量基于每克所述重氮基修飾的高分子載體為1500-4000U。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述賴氨酸脫羧酶的量基于每克所述重氮基修飾的高分子載體為2000-3500U。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述賴氨酸脫羧酶的量基于每克所述重氮基修飾的高分子載體為2500-3000U。

9.根據權利要求5-8任一項所述的制備方法，其特征在于，所述重氮基修飾的高分子載體與所述賴氨酸脫羧酶在緩沖溶液中反應的反應溫度為0-30℃；

和/或，所述重氮基修飾的高分子載體與所述賴氨酸脫羧酶反應的反應時間為0.5-48h。

10.根據權利要求5-8任一項所述的制備方法，其特征在于，所述含苯胺基的醚化劑為對β-硫酸酯乙砜基苯胺；

和/或，所述重氮化反應的反應溫度為0-50℃；

和/或，所述重氮化反應的反應時間為1-60min。

11.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于，所述亞硝酸鹽為亞硝酸鈉和/或亞硝酸鉀，所述強酸為鹽酸和/或硫酸。

12.一種1,5-戊二胺的制備方法，其包括以下步驟：將權利要求1-4任一項所述的固定化賴氨酸脫羧酶與賴氨酸或賴氨酸鹽反應；

或，將如權利要求5-11任一項所述的制備方法制得的固定化賴氨酸脫羧酶與賴氨酸或賴氨酸鹽反應。

13.根據權利要求12所述的制備方法，其特征在于，賴氨酸鹽包括賴氨酸鹽酸鹽、賴氨酸硫酸鹽、賴氨酸碳酸鹽、賴氨酸磷酸鹽、賴氨酸己二酸鹽和賴氨酸癸二酸鹽中的一種或其組合。