[發明專利]一種青蒿鯊烯合酶基因及其cDNA的克隆方法在審
| 申請號： | 201610715468.8 | 申請日： | 2016-08-25 |
| 公開（公告）號： | CN107779449A | 公開（公告）日： | 2018-03-09 |
| 發明（設計）人： | 楊美寧 | 申請（專利權）人： | 楊美寧 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12N15/54 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 741000 甘*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 青蒿 鯊烯合酶 基因 及其 cdna 克隆 方法 | ||
1.一種青蒿鯊烯合酶基因及其cDNA的克隆方法， PCR 擴增以提取的青蒿DNA為模板，SSPri5、SSPri3為上下游引物，用Takara公司的One Shot LA PCR Mix擴增，擴增條件為： 94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30個循環→72℃，10min→4℃RTPCR擴增以提取的青蒿RNA為模板，轉化DH5α感受態細胞，涂板，藍白斑篩選重組子;分別經PCR擴增和EcoRⅠ酶切進行鑒定;PCR擴增采用Promega公司的Tf1酶，反應條件為：94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30個循環→72℃，10min→4℃;最后在 ABI Prism310DNA測序儀上用T7啟動子引物測序。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征是：擴增條件為： 94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30個循環→72℃，10min→4℃RTPCR擴增以提取的青蒿RNA為模板，轉化DH5α感受態細胞，涂板，藍白斑篩選重組子;分別經PCR擴增和EcoRⅠ酶切進行鑒定;PCR擴增采用Promega公司的Tf1酶，反應條件為：94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30個循環→72℃，10min→4℃;最后在 ABI Prism310DNA測序儀上用T7啟動子引物測序。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征是：PCR擴增采用Promega公司的Tf1酶，反應條件為：94℃，1min→94℃，30s，57℃，1min，72℃，5min，30個循環→72℃，10min→4℃;最后在 ABI Prism310DNA測序儀上用T7啟動子引物測序。
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