[發明專利]一種測定養血清腦水提浸膏中生物堿成分含量的方法

有效

• 申請號: 201610708548.0
• 申請日: 2016-08-23
• 公開（公告）號: CN107764908B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 徐波;牛濤;陳紅;張學敏
• 申請（專利權）人: 天津天士力現代中藥資源有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為

本發明涉及一種測定養血清腦水提浸膏中生物堿成分含量的方法，本發明所述方法，包括以下步驟：供試品溶液的制備、對照品溶液的制備和含量測定，本發明所述方法能夠有效去除干擾成分，同時可以對生物堿成分進行有效富集，該方法高效快速，穩定性好，靈敏度高、能夠在5分鐘內實現四種生物堿成分的有效分離，經驗證本發明的質量控制方法精密度、重現性、穩定性良好，能夠有效測定養血清腦水提浸膏中生物堿成分。

技術領域

本發明涉及一種中藥提取物中有效成分的含量測定方法，特別涉及一種測定養血清腦水提浸膏中生物堿成分含量的方法。

背景技術

養血清腦顆粒和養血清腦丸是由當歸、川芎、白芍、熟地黃、鉤藤、雞血藤、夏枯草、決明子、珍珠母、延胡索、細辛十一味中藥和輔料制成的復方中藥。養血清腦水提浸膏是養血清腦顆粒和養血清腦丸的制劑中間體。制備工藝為：熟地黃、鉤藤、雞血藤、夏枯草、珍珠母、細辛加水煎煮，濾過，濃縮，加乙醇靜置，濾過，回收乙醇并濃縮至適量，即得養血清腦水提浸膏。

《中國藥典》2015年版公開了養血清腦兩種制劑的含量檢測，都是對芍藥苷的檢測，其供試品的制備方法為：取本品內容物，研細，取約0.08g，精密稱定，置20ml燒杯中，加0.2％碳酸氫鈉，超聲處理5分鐘，通過D101大孔吸附樹脂柱，用水洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇洗脫，收集洗脫液，加水至刻度，搖勻，離心5分鐘，取上清液，濾過，取續濾液，即得；色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以異丙醇-甲醇枸櫞酸溶液(2：18：80)為流動相，檢測波長為240nm，理論板數按照芍藥苷峰計算應不低于2000。

養血清腦制劑中，鉤藤在配方中發揮著重要作用，具有清熱平肝，息風定驚功效，與養血清腦制劑“養血平肝，活血通絡”的功效相契合。而生物堿是鉤藤藥材的主要活性成分，在藥典中并沒有對養血清腦制劑中的鉤藤成分進行檢測的報道。

發明人前期針對養血清腦水提浸膏中的生物堿成分進行了深入研究，利用SPE-UPLC方法，建立了生物堿成分的分離純化方法，實現生物堿成分的有效分離。采用串聯四級桿飛行時間質譜(Q-TOF/MS)液質聯用儀對養血清腦水提浸膏中的生物堿成分進行了結構鑒定，通過對一級、二級碎片分析和對照品比對，確定主要含有四種生物堿成分，分別為鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿和異去氫鉤藤堿。

針對養血清腦水提浸膏，目前已經建立起了一整套全面地的工藝質量控制體系，但是，還沒有針對生物堿成分的質量分析方法。

為進一步提升產品質量控制水平，全面掌握產品質量，發明人針對養血清腦水提浸膏中的生物堿成分建立了含量測定方法，并進行了方法學驗證。

發明內容

本發明涉及一種測定養血清腦水提浸膏中生物堿成分含量的方法，該方法采用超高效液相色譜法。

本發明所述方法，包括以下步驟：供試品溶液的制備、對照品溶液的制備和含量測定。

其中，所述供試品溶液的制備包括以下步驟：取養血清腦水提浸膏約0.2g，精密稱定，35％-45％甲醇10mL超聲溶解，上至已處理好的ProElut C₁₈-U(500mg/6mL)柱，用35％-45％甲醇5mL洗滌，洗滌液棄去，用甲醇4.5mL洗脫，收集洗脫液，用甲醇定容至5mL，搖勻，即得；

其中，所述對照品溶液的制備包括以下步驟：

以鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿和異去氫鉤藤堿作為對照品，用甲醇配制成每毫升含鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿和異去氫鉤藤堿為0.008-0.012mg、0.01-0.02mg、0.001-0.002mg和0.004-0.006mg的溶液，既得；

其中，所述含量測定，包括以下步驟：分別取對照品溶液和供試品溶液各1-3ul，注入液相色譜儀，記錄峰面積，外標法計算供試品溶液中鉤藤堿、異鉤藤堿、去氫鉤藤堿和異去氫鉤藤堿的含量；