[發明專利]一種基于反相色譜飛行時間質譜的喉癌血清差異代謝物的測定篩選方法

有效

• 申請號: 201610702483.9
• 申請日: 2016-08-23
• 公開（公告）號: CN106324173B
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 胡清源;侯宏衛;張小濤;陳歡;劉勇;王安;劉彤;韓書磊;付亞寧
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心;中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

一種基于反相色譜飛行時間質譜的喉癌血清差異代謝物的測定篩選方法，其特征在于：血清經過有機溶劑?甲醇沉淀蛋白以后，然后離心、真空離心干燥，然后復溶于200 μL的純水，引入反相色譜飛行時間質譜儀進行測定，經過峰對齊、校正和標準化、多變量統計分析和譜庫檢索可以找到喉癌志愿者和健康志愿者血清中的差異代謝物。本發明為全新的血清中差異代謝物的鑒定方法，通過差異代謝物可以反應喉癌患者血清代謝物的變化情況，將有助于喉癌的診斷、臨床治療、預后判斷及其發病機制的研究。

技術領域：

本發明屬于血清的理化檢驗技術領域，具體說是一種基于反相色譜飛行時間質譜的喉癌血清差異代謝物的測定篩選方法。

背景技術：

常見的喉癌類型為鱗片狀細胞癌，具有高發病率和高復發率的特點，且容易發生頸部淋巴結轉移。在喉癌的治療中主要采用手術為主的喉切術，并輔以放化療，但其對于化療不敏感，且容易引起患者發音、吞咽功能差，生存質量降低等問題，早期喉癌治療效果較好而晚期喉癌療效差，但對于喉癌的早期診斷仍然缺乏十分有效的生物標志物。因此，新的生物標志物的發現對于臨床上實現喉癌的早期診斷和治療具有重要意義。代謝組學是繼基因組學和蛋白質組學之后新近發展起來的一門學科，是對某一生物或細胞在一特定生理時期內所有低分子量代謝產物同時進行定性和定量分析的一門新學科。代謝組學技術可以發現新的生物標志物，這將有助于頭頸癌的診斷、臨床治療、預后判斷及其發病機制的研究。

對于具有診斷功能的生物標志物的發現，往往采用非入侵或者少入侵的體液，如血液和尿液等。尿液中包含許多的代謝終產物，以及營養物質、藥物和外源性物質的代謝物，而血液反應的往往是一些內生性的代謝物。但是對于臨床診斷，往往多采用血液，這是因為24 小時尿液樣本的收集比較繁瑣和容易出錯，晨尿中化合物的濃度容易受到受試者所攝入的液體（如飲料、水等）的影響，不能完全代表受試者當時的狀態，而血液流過受試者的全身，能夠很好的反應受試者的身體狀況。目前，血清已經被廣泛用于肺癌、鼻咽癌的差異代謝物的研究，而用于喉癌差異代謝物的研究還未見報道。

發明內容：

本發明的目的旨在克服現有技術缺陷，建立一種簡單、快速、選擇性好的篩選喉癌志愿者和健康志愿者血清中差異代謝物的反相色譜飛行時間質譜方法，該方法能快速、準確鑒定血清中的差異代謝物。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種基于反相色譜飛行時間質譜的喉癌血清差異代謝物的測定篩選方法，是以喉癌志愿者和健康志愿者血清為樣本進行測定、比較、篩選，具體包括以下工藝步驟：

a、血液在室溫下解凍，移取400 μL的血清，加入1200 μL的甲醇，渦旋混合15 s，然后以15800 g離心力在離心機中離心15 min；

b、移取370 μL的上清液于2 mL的離心管中，然后于真空離心機中離心干燥，然后復溶于200 μL的純水中，然后裝入色譜瓶中待測；

c、反相色譜飛行時間質譜對所有血清樣本進行逐一分析，得原始數據；

d、將原始數據轉換為mzXML的格式后，對數據進行峰對齊、校正、濾噪后，采用SIMCA-P進行多變量統計分析，篩選VIP大于1的代謝物。

e、用SPSS進行T檢驗，對于P<0.05且VIP大于1的為潛在差異代謝物。

f、對于潛在差異代謝物，采用譜庫檢索或者標準品比對等方法進行驗證，即為差異代謝物。